本课题主要研究白术七物颗粒剂对STC模型小鼠的通便作用,研究这种便秘模型小鼠在白术七物颗粒剂干预下结肠抑制性神经递质NO、VIP、兴奋性神经递质Ache、SP、ICC及c-kit、5-HT4、AQP8等改变情况,从而发现白术七物颗粒剂在治疗STC中的可能作用机制,不仅为STC的中医中药治疗提供实验依据,而且为“益气养阴,行气运下”法治疗STC提供理论依据,同时也指导临床,为临床治疗提供理论参考。第一部分:STC模型的制备目的:复制STC小鼠模型方法:将112只小鼠随机分成空白组、模型1、2、3、4、5、6组,共7组,每组16只,雌雄各半。模型各组小鼠皮下注射盐酸吗啡2.5mg.kg-1.d-1,建立STC模型,空白组皮下注射等量生理盐水,共45d。造模前测量小鼠24h粪便干重,造模期间观察小鼠体征、粪便性状变化。45d后,测量小鼠24 h粪便干重。每组随机取6只小鼠,雌雄各半,颈椎脱臼法处死,计算小鼠肠道推进率。综上,验证STC小鼠模型建立成功。结果:112只小鼠无死亡;与空白组比较,模型各组小鼠活动较倦怠少动;模型各组小鼠饮食、小便、毛色正常,无显著差异。造模前,与空白组比较,模型各组小鼠体重无显著差异(P>0.05),无统计学意义。经过45天造模,与空白组比较,模型各组小鼠体重未见明显减轻,无显著差异(P>0.05),无统计学意义。造模前,与空白组比较,模型各组小鼠24小时排便重量无显著差异(P>0.05),无统计学意义。造模后,与空白组比较,模型各组小鼠大便明显干结,呈分离的硬团状或团块状粪便,排便粒数明显减少,排便重量明显减轻,有明显差异(P<0.05),有统计学意义。与空白组比较,模型组1、3、4、5、6小鼠肠道推进率显著降低(P<0.01),有高度统计学意义;模型组2小鼠肠道推进率明显降低(P<0.05),有统计学意义。结论:按照2.5mg.kg-1.d-1的剂量,连续45天,皮下注射盐酸吗啡注射液的方法进行造模,可以成功复制出STC模型,且该种方法操作简单,安全性高。模型各组小鼠大便明显干结,呈分离的硬团状或团块状粪便,排便粒数明显减少,符合STC的粪便性状改变标准。模型各组小鼠肠道传输功能明显降低,符合STC的临床诊断标准。综上,STC模型复制成功。第二部分:白术七物颗粒剂对STC模型小鼠通便效应、肠道动力影响研究目的:研究STC模型小鼠在白术七物颗粒剂干预下的通便作用。方法:STC小鼠模型建立成功后,剩余70只小鼠,雌雄各半,空白组不变,余60只小鼠随机分成模型组、白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙必利组,每组10只,雌雄各半。空白组、模型组给与生理盐水灌胃,余各组给予相应的药物灌胃14d。观察白术七物颗粒剂对STC模型小鼠首次排黑便时间、肠道推进率的影响。结果:70只小鼠无死亡;与空白组比较,给药各组小鼠活动、饮食、小便、毛色正常,未见显著差异。与模型组比较,经给药后,给药各组小鼠倦怠少动症状逐渐改善,粪便水分增多,排便粒数增多,香肠状或团块状光滑软便增加。给药前,与空白组比较,模型组体重无显著差异(P>0.05),无统计学意义。与模型组比较,白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组体重无显著差异(P>0.05),无统计学意义。经过14天给药,与空白组比较,模型组体重无显著差异(P>0.05),无统计学意义。与模型组比较,白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组体重无显著差异(P>0.05),无统计学意义。与空白组比较,模型组小鼠首次排黑便时间显著延长(P<0.01),具有高度统计学意义。与模型组比较,白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙必利组小鼠首次排黑便时间显著缩短(P<0.01),有高度统计学意义。与白术七物颗粒剂高剂量组比较,白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利小鼠首次排黑便时间无显著差异(P>0.05),无统计学意义。与空白组比较,模型组小鼠肠道推进率显著降低(P<0.01),有高度统计学意义;与模型组比较,白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙必利组小鼠肠道推进率显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。与白术七物颗粒剂高剂量组比较,白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙必利组小鼠肠道推进率无显著差异(P>0.05),无统计学意义。结论:1.白术七物颗粒剂可以改善STC模型小鼠的大便性状。2.白术七物颗粒剂通过促进STC模型小鼠的排便,改善排便功能,从而达到治疗STC的作用。3.白术七物颗粒剂通过加快肠道推进速度,提高肠道推进率,促进STC模型小鼠肠蠕动,达到治疗STC的作用。4.白术七物颗粒剂促进STC小鼠的排便,改善排便功能,促进肠蠕动作用与麻仁软胶囊、莫沙比利相当。第三部分:白术七物颗粒剂对STC小鼠多机理干预机制研究目的:研究STC模型小鼠在白术七物颗粒剂干预下结肠抑制性神经递质NO、VIP、兴奋性神经递质Ache、SP、ICC及c-kit、5-HT4、AQP8等改变情况,从而发现白术七物颗粒剂在治疗STC中的可能作用机制。方法:应用ELISA、RT-PCR、HE染色及免疫组化方法检测白术七物颗粒剂对STC模型小鼠结肠组织抑制性神经递质NO、VIP、兴奋性神经递质Ache、SP、ICC及c-kit、5-HT4、AQP8的表达。结果:ELISA法检测结果分析:与空白组比较,模型组NO含量明显升高(P<0.05),有统计学意义;模型组VIP含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;模型组Ache含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义;模型组SP含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。与模型组比较,白术七物颗粒剂低剂量组NO含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中剂量组NO含量明显降低(P<0.05),有统计学意义;白术七物颗粒剂高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组NO含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组VIP含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量Ache含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组Ache含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低、中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组SP含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。与白术七物颗粒剂高剂量组比较,白术七物颗粒剂低、中剂量组NO含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;麻仁软胶囊组、莫沙比利组NO含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组VIP含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;麻仁软胶囊组、莫沙比利组VIP含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组Ache含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义;莫沙比利组Ache含量明显升高(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组SP含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。RT-PCR检测结果分析:与空白组比较,模型组c-kit含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。模型组5-HT4含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。模型组AQP8显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。与模型组比较,白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组c-kit含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂高剂量组c-kit含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;莫沙比利组c-kit含量明显升高(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量、麻仁软胶囊组5-HT4含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、莫沙比利组5-HT4含量显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;白术七物颗粒剂低剂量AQP8含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组AQP8含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。与白术七物颗粒剂高剂量组比较,白术七物颗粒剂低剂量组c-kit含量显著降低(P<0.01),有高度统计学意义;白术七物颗粒剂中剂量组c-kit含量明显降低(P<0.05),有统计学意义;麻仁软胶囊组、莫沙比利组c-kit含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组5-HT4含量无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量组AQP8显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;白术七物颗粒剂中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组AQP8无显著差异(P>0.05),无统计学意义。HE染色分析:模型组小鼠结肠组织神经元细胞减少,同时见炎症细胞浸润粘膜层,评分为++或+++。各治疗组小鼠结肠神经元细胞明显恢复,结肠组织炎症细胞浸润减少,评分大部分为±或-。免疫组化分析:与空白组比较,模型组NO平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义。模型组VIP平均光密度显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。模型组Ache平均光密度显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。模型组SP平均光密度显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。模型组c-kit平均光密度显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。模型组5-HT4平均光密度显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。模型组AQP8平均光密度显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。与模型组比较,白术七物颗粒剂低、中剂量组NO平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组NO平均光密度显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量组VIP平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、莫沙比利组VIP平均光密度显著降低(P<0.01),有高度统计学意义。麻仁软胶囊组VIP平均光密度明显降低(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量Ache平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中剂量组、麻仁软胶囊组Ache平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂高剂量组、莫沙比利组Ache平均光密度显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量SP平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组SP平均光密度显著升高(P<0.01),有高度统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组c-kit平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂高剂量组c-kit平均光密度显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;莫沙比利组c-kit平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量5-HT4平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、麻仁软胶囊组5-HT4平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义;莫沙比利组5-HT4平均光密度显著升高(P<0.01),有高度统计学意义;白术七物颗粒剂低剂量组AQP8平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义;白术七物颗粒剂中、高剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组AQP8平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义。与白术七物颗粒剂高剂量组比较,白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组NO平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量组VIP平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组VIP平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量组Ache平均光密度明显降低(P<0.05),有统计学意义;白术七物颗粒剂中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组Ache平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量组SP平均光密度明显降低(P<0.05),有统计学意义;白术七物颗粒剂中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组SP平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组c-kit平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低、中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组5-HT4无显著差异(P>0.05),无统计学意义。白术七物颗粒剂低剂量组AQP8平均光密度明显升高(P<0.05),有统计学意义。白术七物颗粒剂中剂量组、麻仁软胶囊组、莫沙比利组AQP8平均光密度无显著差异(P>0.05),无统计学意义。结论:1.白术七物颗粒剂通过降低NO、VIP的含量加强胃肠道平滑肌的收缩,使胃肠蠕动增强,从而达到治疗STC的作用。2.白术七物颗粒剂通过增加Ache、SP的含量兴奋平滑肌,刺激肠道运动,从而达到治疗STC的作用。3.白术七物颗粒剂通过增加ICC的c-kit含量,加快电兴奋传递,增强结肠运动,从而达到治疗STC的作用。4.白术七物颗粒剂通过增加5-HT4含量,促进肠蠕动,从而达到治疗STC的作用。5.白术七物颗粒剂通过降低AQP8含量,减少肠道水分吸收,来治疗STC。6.白术七物颗粒剂高剂量治疗STC作用最显著。