基因转移逆转椎间盘退变的实验研究第三部分:成人退变椎间盘细胞模型的建立及Ad/CMV-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞后的表达的研究

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目的:找到一种合适的培养成人退变椎间盘细胞的方法,利用Ad/CMV-hTGF-β1进行转染,测定hTGF-β1的表达以及蛋白多糖和胶原的合成情况并观察转染后细胞超微结构的变化,以便正确的评价Ad/CMV-hTGF-β1在退变性椎间盘疾病治疗中的作用。 方法:1.利用组织块法结合酶消化法对手术取出的病人退变椎间盘组织进行原代细胞培养。2.利用本实验室构建的Ad/CMV-hTGF-β1转染体外培养的成人退变椎间盘细胞,分别观察髓核、纤维环细胞的hTGF-β1表达。3.利用本实验室构建的Ad/CMV-hTGF-β1转染体外培养的成人退变椎间盘细胞后分别观察髓核、纤维环细胞的蛋白多糖、胶原的合成。4.利用透射电镜观察转染后细胞超微结构的变化。 结果:1.成功的在体外建立了成人退变椎间盘细胞模型。2。成功的利用Ad/CMV-hTGF-β1对体外培养的成人退变椎间盘细胞进行了转染,hTGF-β1的表达,蛋白多糖和胶原的合成与对照组相比p<0.05,3.透射电镜观察,Ad/CMV-hTGF-β1转染后的成人退变椎间盘细胞的结构以及功能有一定的改善。 结论:1.组织块培养法结合酶消化法能成功的进行成人退变椎间盘细胞的培养。2.本实验室构建的Ad/CMV-hTGF-β1能有效的转染体外培养的成人退变椎间盘细胞并获得hTGF-β1的高效表达,促进蛋白多糖和胶原的合成,改善退变细胞的结构和功能。
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