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目的:本实验旨在研究金果胃康胶囊对萎缩性胃炎癌前病变大鼠的一般情况、胃黏膜病理形态学的改变及对胃黏膜细胞自噬水平的调控作用,从微观角度阐明金果胃康胶囊对胃癌前病变大鼠胃黏膜保护作用的机制,探讨该药治疗萎缩性胃炎癌前病变的意义。方法:选取90只SPF级雄性Wistar大鼠,将其按随机数字表法,分为空白组10只和模型组80只。模型组采用综合造模法(MNNG负荷乙醇、雷尼替丁、饥饱失常)连续造模16周,第16周随机抽取造模组及空白组各3只大鼠处死,取材后观察胃组织病理学变化,确认造模成功。造模结束后,运用随机数字表法将模型动物分为模型组、金果胃康胶囊高剂量组(1.8g/kg)、金果胃康胶囊中剂量组(0.9g/kg)、金果胃康胶囊低剂量组(0.45g/kg)、3-MA组(1.6mg/kg)、雷帕霉素组(2mg/kg)和叶酸组(2mg/kg)。各组均给予相应药物灌胃治疗,空白组及模型组每日灌胃去离子水。均2ml/只/天,连续给药8周。灌胃期间每日观察大鼠的精神、饮食饮水量、皮毛色泽及大小便情况,每周称取记录体重一次。治疗8周后全部实验大鼠禁食水16h后取材,HE染色光镜下观察胃黏膜的病理变化情况;电镜下观察大鼠胃黏膜上皮细胞自噬泡等超微结构变化;使用免疫组化检测自噬分子LC3及P62的蛋白表达情况;Western blot检测细胞自噬分子LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及P62的蛋白表达情况,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以综合评价自噬水平。结果:⑴模型复制:第16周大鼠萎缩性胃炎癌前病变模型成功复制。在除去第16周用于模型验证及对照的6只大鼠,及造模期间意外死亡的7只大鼠,最终剩余77只大鼠用于最终结果分析。⑵各组大鼠一般情况:造模后,模型组大鼠一般情况较差,较空白组大鼠差异显著。治疗后,金果胃康各剂量组、叶酸组及雷帕霉素组大鼠一般情况较治疗前有不同程度的改善。3-MA组大鼠一般情况与模型组大鼠类似。⑶各组大鼠体重变化:在大鼠胃癌前病变模型建立之前,空白组大鼠的体重与模型组大鼠的体重未显示显著差异。造模成功后,空白组体重与模型组的体重差异显著(P<0.01)。另外,在模型复制期间造模组大鼠体重的增长值与空白组大鼠相比有显著差异(P<0.01)。药物干预后,金果胃康高、中剂量组大鼠体重升高明显与模型组大鼠体重对比有极显著差异(P<0.01),以金果胃康高剂量组最为显著。叶酸组及金果胃康低剂量组大鼠体重与模型组大鼠体重对比差异显著,有统计学意义(P<0.05)。⑷各组大鼠病理形态学变化:造模后,经HE染色,病理学观察显示空白组大鼠胃黏膜结构正常,模型组胃黏膜出现程度不一的萎缩、肠化、或异型增生。治疗后,金果胃康各剂量组及叶酸、雷帕霉素组均在不同程度上改善了胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理组织学结构。其中以金果胃康高剂量组尤为明显。3-MA组大鼠未见明显改善。⑸电镜结果:药物干预后,金果胃康各剂量组及叶酸、雷帕霉素组大鼠胃黏膜上皮细胞与模型组大鼠胃黏膜上皮细胞相比,细胞核浆比趋于正常,自噬泡数量明显增多,其中以金果胃康高剂量组尤为明显。与空白组相比,模型组与3-MA组大鼠胃黏膜上皮细胞出现细胞核异形改变,线粒体等数量减少,自噬泡数量少。⑹免疫组化结果:(1)与空白组相比较,各组大鼠胃黏膜LC3蛋白表达均降低,空白组>叶酸组>雷帕霉素组>金高组>金低组>金中组>模型组>3MA组。与模型组相比,除3MA组,各药物干预组LC3的表达量均不同程度的升高。(2)与空白组相比较,各组大鼠胃黏膜P62蛋白表达均升高。与模型组相比,除3MA组,各药物干预组P62蛋白的表达量均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。⑺Western blot结果:(1)各组大鼠的LC3-Ⅰ蛋白的表达未显示显著差异。(2)与空白组相比较,各组大鼠胃黏膜LC3-Ⅱ的蛋白量均降低,差异具有统计学意义,(P<0.05);与模型组相比,除3MA组,各药物干预组LC3-Ⅱ的表达量均升高,其中,金高组、雷帕霉素组、叶酸组大鼠LC3-Ⅱ的表达量显著升高(P<0.01),金中组、金低组大鼠LC3-Ⅱ的表达亦增高(P<0.05),3MA组大鼠LC3-Ⅱ的表达显著降低,(P<0.01)。(3)与空白组比较,各组大鼠胃黏膜LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均降低,空白组>金高组>雷帕霉素组>叶酸组>金中组>金低组>3MA组>模型组。与模型组相比,各组大鼠LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均升高,金果胃康高剂量组及雷帕霉素组较为明显。(4)与空白组相比,金果胃康各剂量组及叶酸、雷帕霉素组P62的表达均显著降低(P<0.01),模型组及3MA组显著增高(P<0.05);与模型组相比,各组大鼠P62的表达均显著降低(P<0.01)。结论:⑴本实验通过采用MNNG负荷乙醇、雷尼替丁、饥饱失常的综合造模法成功复制了PLGC大鼠的模型。结果显示金果胃康不仅能有效改善PLGC大鼠的一般情况,同时,HE染色结果提示,金果胃康也能在一定程度上缓解病理发展。电镜结果提示金果胃康胶囊可通过调控细胞自噬从而改善大鼠胃黏膜情况。⑵本研究应用Western blot、免疫组化等技术对PLGC大鼠胃黏膜组织LC3及P62的表达进行研究。结果表明,金果胃康可调控自噬相关蛋白从而干预或逆转胃黏膜病理状态,从而起到保护胃黏膜的作用,这可能是金果胃康治疗PLGC的重要作用机制之一。