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目的:探讨银杏叶提取物对脑缺血-再灌注(CIRI,以下简称 I/R)后急性肺损伤保护作用的机制,寻找出治疗脑缺血-再灌注后所致肺组织损伤以及全身组织损伤和脏器损伤比较有效的中药,为临床用药提供理论依据,为拓展中医药在防治缺血性脑血管疾病的领域提供理论和实验参考。 方法:36只SD大鼠随机等分为假手术(S)组、缺血-再灌注(I/R)组、银杏叶提取物+缺血/再灌注(EGB+I/R)组。测量大鼠单侧脑缺血90min再灌注24h后肺组织湿/干比,电镜观察肺组织损伤情况,肺组织匀浆后测定髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量以及非对称性二甲基精氨酸(ADMA)含量,对肺泡灌洗液(BALF)进行中性粒细胞计数,ADMA含量分析,对出入肺血进行ADMA含量检测。通过 western blot及RT-PCR方法检测肺大鼠蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMT)和二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)蛋白及mRNA的表达,探讨缺血再灌注后急性肺损伤与非对称性二甲基精氨酸/二甲基精氨酸二甲胺水解酶(ADMA/DDAH)机制的关系。 结果:(1)I/R组的湿/干比增大,与 S组比较有统计学意义(P<0.05);EGB+I/R组湿/干比较I/R组减少,与I/R组比较有统计学意义(P<0.05); EGB+I/R组较S组有所增加,但与S组比较没有统计学意义(P>0.05)。(2)I/R组MPO活性和MDA含量增加,与S组比较有统计学意义(P<0.05);EGB+I/R组MPO活性和MDA含量较I/R组减少,与I/R比较有统计学意义(P<0.05); EGB+I/R组与S组比较没有统计学意义(P>0.05)。(3)I/R组NO和NOS含量有所增加,但与S组比较无统计学意义(P>0.05);EGB+I/R组NO和NOS含量较 I/R组减少,与I/R比较无统计学意义(P>0.05)。(4)电镜下S组肺组织结构完整,支气管及肺泡腔完整性好,无充血及炎性细胞浸润,纹理清晰,色泽正常。I/R组肺组织毛细血管充血,肺泡间隔炎性细胞浸润,肺泡腔内大量炎性细胞渗出、出血及炎性渗液积聚,部分肺泡壁破裂、融合,肺泡壁增厚;EGB+I/R组肺组织毛细血管充血及炎性细胞浸润现象不明显,较I/R组炎性细胞浸润和组织损伤现象明显减轻。(5)I/R组的肺泡灌洗液中性粒细胞计数有所增加,与 S组比较有统计学意义(P<0.05);而 EGB+I/R组肺泡灌洗液中性粒细胞计数较 I/R组减少,与 I/R比较有统计学意义(P<0.05); EGB+I/R组与S组比较没有统计学意义(P>0.05)。(6)肺泡灌洗液、外周血和入肺血中I/R组的ADMA含量显著增加,与S组比较有统计学意义(P<0.05);而EGB+I/R组肺泡灌洗液和入肺血中ADMA含量较I/R组减少,与I/R比较有统计学意义(P<0.05); EGB+I/R组与S组比较没有统计学意义(P>0.05)。出肺血中I/R组的ADMA含量显著减少,与S组比较有统计学意义(P<0.05);而EGB+I/R组出肺血中的ADMA含量较I/R组减少,与I/R比较有统计学意义(P<0.05);EGB+I/R组较S组有所增加,但与S组比较没有统计学意义(P>0.05)。(7)肺组织中PRMT蛋白在缺血再灌注后表达增强,DDAH蛋白在缺血再灌注后表达降低,I/R组与S组比较有统计学意义(P<0.05),再灌注后PMRT蛋白明显增高,与EGB+I/R组比较有统计学意义(P<0.05);PRMT mRNA水平在缺血再灌注后表达增强,DDAH mRNA水平在缺血再灌注后表达降低,与S组比较有统计学意义(P<0.05),再灌注后PMRT mRNA水平增高,与EGB+I/R组比较有统计学意义(P<0.05)。EGB+I/R组PRMT蛋白在缺血再灌注后与I/R组比较有所降低,有统计学意义(P<0.05),DDAH蛋白在缺血再灌注后表达与I/R组比较有统计学意义(P<0.05)。蛋白表达变化与mRNA变化相一致。 结论:(1)银杏叶提取物可以降低大鼠脑缺血再灌注后肺组织的干湿比,减轻肺水肿,保护肺组织。(2)银杏叶提取物可以降低大鼠脑缺血再灌注损伤后肺组织MDA含量,抑制MPO活性,抑制NO及NOS过量表达,减少氧化应激损害,抑制自由基的生成,从而起到保护肺组织的作用。(3)银杏叶提取物可以减轻大鼠脑缺血再灌注后肺组织的炎性细胞浸润,减轻肺组织炎症反应,有利于受损肺组织的自身修复。(4)银杏叶提取物可以降低脑缺血再灌注后急性肺损伤大鼠肺泡灌洗液、外周血、入肺血的ADMA含量,从而减轻了ADMA对肺组织和肺微血管内皮细胞的损害,一定程度上抑制了氧化应激损害,减轻了自由基的攻击程度,发挥了肺保护作用。(5)ADMA及DDAH的消长变化对大鼠脑缺血再灌注后肺损伤的损害和保护作用具有重要意义,ADMA/DDAH通道可能对大鼠脑缺血再灌注所致肺组织炎性损伤有保护作用,对大鼠脑缺血再灌注后肺组织氧化应激损伤有一定改善作用,其机制可能与 ADMA/DDAH通道的活化有关。(6)银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注肺损伤的保护作用来源于其益气活血作用,这种祛瘀与扶正相结合的方法可以推广到大鼠脑缺血再灌注其他脏器损伤的治疗上,从而可以最大程度的发挥祖国医学的治疗作用和治疗范围。