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目的:研制细胞搏动培养装置。方法:1.将50ml培养瓶的瓶底和细胞生长面分别钻一圆形小孔后作为生物反应器,通过直流电脉冲电磁泵控制器控制的搏动泵提供搏动流,构建细胞搏动培养装置。2.检测其搏出量、工作状态时的温度;用监护仪显示生物反应器中的压力大小和波形;取已鉴定的人脐静脉内皮细胞分别在搏动、静态两种状态下培养。3.培养24小时后,光镜下观察搏动和静态培养的人脐静脉内皮细胞形态、排列;考马斯亮蓝R250染色观察细胞骨架,评价装置的应用价值和检测装置的毒性。
结论:1.本细胞搏动培养装置物理学性能稳定、无细胞毒性2.为体外细胞培养提供有效的切应力和模拟的生理内环境
第二部分搏动状态下体外细胞培养和牛颈静脉内皮化的实验研究
目的:探究搏动对内皮细胞培养和牛颈静脉内皮化的影响。
方法:1、获取人脐静脉内皮细胞,Ⅷ因子染色鉴定。
2、牛颈静脉脱细胞和光氧化处理后,清洗、灭菌保存。电镜扫描观察血管内皮层和胶原纤维结构。
3、分别在搏动(A组)、静态(B组)两种状态下培养脐静脉内皮细胞,传4代;光镜下观察内皮细胞的形态、排列。
4、再取A、B两组的第4代细胞,每组都用搏动(A1、B1)、静态(A2、B2)两种方式种植到经过脱内皮细胞和光氧化处理的牛颈静脉血管片上,每组5个标本。
5、在不同的时间点取实验中的牛颈静脉血管片,分别给予脱细胞后活细胞计数、液氮储存24小时后,用RT-PCR方法检测实验中的牛颈静脉血管片的eNOSmRNA的表达。
6、18天后,取内皮化牛静脉血管片电镜扫描观察牛颈静脉血管片内皮化的程度。
结论:1、搏动种植,增高内皮细胞的活性的表达,有助于牛颈静脉内皮化。
2、搏动培养可增强内皮细胞的黏附力。