【摘 要】
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目的:由于目前临床使用的磁共振对比剂多为非靶向性,很难适应个性化精准医疗的发展需求。本研究旨在通过构建一种靶向肿瘤细胞血管内皮生长因子受体-2（Vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2）的磁共振靶向对比剂,对VEGFR-2高表达的肿瘤细胞进行体外靶向性成像,探究靶向对比剂在肿瘤细胞特异性分子成像中的可行性、靶向能力和强化效果,以期为
【基金项目】
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涂蓉教授主持的2014年国家自然科学基金项目:荧光-钆双模态磁共振靶向对比剂对微小肿瘤VEGFR-2精准定位显像的实验研究（项目编号:81460262）；
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目的:由于目前临床使用的磁共振对比剂多为非靶向性,很难适应个性化精准医疗的发展需求。本研究旨在通过构建一种靶向肿瘤细胞血管内皮生长因子受体-2（Vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2）的磁共振靶向对比剂,对VEGFR-2高表达的肿瘤细胞进行体外靶向性成像,探究靶向对比剂在肿瘤细胞特异性分子成像中的可行性、靶向能力和强化效果,以期为活体内成像和实现肿瘤的靶向诊断奠定基础。方法:（1）筛选VEGFR-2高表达的肿瘤细胞株:培养人肝癌细胞HepG2、人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299、人宫颈癌细胞HeLa、人肺腺癌细胞A549,采用细胞免疫荧光法及Western Blot法检测肿瘤细胞株VEGFR-2表达情况,筛选出受体表达量最高的肿瘤细胞。（2）Gd-PEG-VEGF125-136的制备:以多肽VEGF125-136为靶向肽,以Gd3+-DOTA为显影剂,通过酰胺键合成法构建磁共振靶向对比剂,然后利用HPLC分离纯化及MS进行检测。（3）Gd-PEG-VEGF125-136的磁共振信号检测:配制梯度浓度的靶向对比剂溶液,利用0.5T Meso MR检测T1信号。（4）VEGFR-2高表达肿瘤细胞株体外磁共振靶向成像:分为实验组、对照组、空白组,以VEGFR-2高表达肿瘤细胞株（人肝癌细胞Hep G2）为对象,加入Gd-PEG-VEGF125-136孵育的作为实验组,加入钆标记随机肽NTSP孵育的作为对照组,不加任何对比剂孵育的作为空白组。利用3.0T西门子磁共振进行体外细胞成像,T1WI序列采集图像和测量各组T1 SNR（信噪比）值。（5）数据统计分析:SNR为计量资料,实验组、对照组、空白组使用SNK（Student-Nwman-Keuls）q检验比较各组间相同浓度的T1 SNR值或同一组内不同浓度的T1 SNR值差异,以P<0.05认为两者差异有统计学意义。结果:（1）细胞免疫荧光实验显示人肝癌细胞Hep G2、人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299、人宫颈癌细胞He La、人肺腺癌细胞A549细胞均有VEGFR-2表达,Western Blot结果显示人肝癌细胞Hep G2表达的VEGFR-2含量最高。（2）HPLC显示靶向对比剂Gd-PEG-VEGF125-136成功从反应产物分离,质谱检测表明Gd-PEG-VEGF125-136偶联成功,纯度达95%以上。（3）0.5T Meso MR扫描显示随着Gd-PEG-VEGF125-136溶液浓度的增加,相应T1WI图像信号增强。（4）3.0T西门子MRI扫描显示当对比剂浓度超过0.125m M时,实验组与对照组、空白组的SNR值差异具有统计学意义（P<0.05）,实验组各浓度间的SNR值差异具有统计学意义（P<0.05）;且浓度（X）与T1 SNR值（Y）有关,相关系数r=0.9365,回归方程Y=257.6*X+103.9。结论:本实验成功构建以VEGFR-2为靶点的磁共振靶向对比剂Gd-PEG-VEGF125-136,体外细胞实验中可以与VEGFR-2高表达细胞株Hep G2特异性结合,在3.0T磁共振显示T1WI信号增强效果,为体内成像实验奠定基础,有望用于磁共振肿瘤靶向成像和早期诊断。
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