高产β-胡萝卜素红酵母的选育及发酵研究

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本课题对实验室保藏的一株红酵母Rhodotorula.spp进行了鉴定,并对其发酵条件作了初步研究。同时,分别用紫外线照射、低能N+注入、高静水压处理对该菌株进行诱变,并重点研究了高静水压突变株的发酵性能。 通过形态学和生理生化指标实验,按照《酵母菌的特征与鉴定手册》提供的检索表确定了该菌株为粘红酵母(Rhodotorula glutinis),并将其编号为NR98。利用正交实验优化该菌株发酵培养基,获得其最佳配比为:葡萄糖4%、蛋白胨2%、酵母膏1%,在此条件下,经过72h培养,NR98的生物量、β-胡萝卜素产量分别达到19.81g/L和6.03mg/L。另外,选定对R.glutinisNR98产β-胡萝卜素具有促进作用的K+、Fe2+ 、正十二烷、正己烷四种促进剂,利用二次回归正交优化设计,计算结果得到每种添加物的最佳添加量分别为0.63%、0.0094%、2.11%、1.52%,得到β-胡萝卜素的理论最高产量为7.61mg/L,而在该最优添加条件下,实际产量为7.34mg/L,比在同条件下没有添加的5.99mg/L提高了22.54%。 其次,利用紫外线照射诱变获得了一株β-胡萝卜素产量有所提高的突变株NR98-Z3,该突变株β-胡萝卜素产量可达到7.09mg/L,比出发菌株提高了18.76%;利用低能离子注入诱变筛选出的高产菌株NR98-L15的β-胡萝卜素产量达到8.03 mg/L,比出发菌株提高了34.51%。而在高静水压处理后筛选出的高产突变株NR98-G36的β-胡萝卜素产量可达到9.64mg/L,比出发菌株提高了53.02%。 用响应面实验对NR98-G36培养条件进行优化,优化后的条件为:酵母膏4.23g/L、接种量30mL/250mL、番茄汁2.5mL/L、培养基装量40mL/250mL、花生油0.5mL/L、pH6.7、葡萄糖26.30g/L、硫酸铵5g/L。在此条件下进行摇瓶实验,β-胡萝卜素产量达到13.43mg/L,比优化前提高了39.32%。
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