目的：1.研究钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活性的影响；2.研究不同浓度钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配基(Receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)及其饵受体骨保护素(Osteoprotegerin，OPG)表达的影响；3.研究细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase-1 and-2，ERK1/2)信号通路在体外培养的小鼠成骨细胞RANKL和OPG表达中的作用。　　方法：小鼠成骨细胞3T3-MC常规培养于含10％胎牛血清和1％青链霉素的DMEM培养基中(培养条件为37％，CO2浓度为5％)。选用第3代小鼠成骨细胞接种于培养瓶中，培养24h成骨细胞完全贴壁后作为研究用的成骨细胞。　　实验1：实验设空白对照组(control)，钛合金颗粒干预A组(0.01 g/L)、B组(0.1 g/L)和C组(1g/L)，每组6个样本。在培养第48h，采用CCK-8法检测成骨细胞增殖活性。　　实验2：实验设空白对照组(control)和钛合金颗粒干预组(0.1g/L)两个大组，根据培养时间又分为24h、48h、96h和168h四个亚组，每组6个样本。分别在培养第24h、48h、96h和168h四个时间点，采用CCK-8法检测成骨细胞增殖活性。　　实验3：(1)实验设空白对照组(control)和钛合金颗粒干预组(0.1g/L)两个大组，每组又分为0h、0.5h、1h、3h和6h五个亚组。分别在培养第0h、0.5h、1h、3h和6h五个时间点，采用Western Blot法检测不同时间点ERK1/2磷酸化水平。(2)实验设空白对照组(control)，钛合金颗粒干预A组(0.01g/L)、B组(0.1g/L)和C组(1g/L)。在培养第0.5h，采用Western Blot法检测不同钛合金颗粒浓度作用下成骨细胞ERK1/2磷酸化水平。　　实验4：按照是否加用ERK1/2特异性抑制剂(PD98059)，将成骨细胞分为无PD98059干预实验组和PD98059干预实验组两个大组，每大组又分为空白对照组(control)，钛合金颗粒干预A组(0.01g/L)、B组(0.1g/L)和C组(1g/L))，再分为24h和48h两个时间点，每组6个样本。分别在培养第24h和48h两个时间点，收集各组细胞和培养基上清液，采用RT-PCR和ELISA检测成骨细胞内及培养基中RANKL和OPG的含量。　　结果：1.实验1结果显示在不同浓度钛颗粒共培养48h后，A组、B组成骨细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；C组成骨细胞增殖活性明显低于对照组、A组和B组，差异有统计学意义(P<0.01)。　　实验2结果显示第24h、48h、96h三个时间点，钛合金颗粒共培养组细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；在96h内，实验组成骨细胞增殖活性逐渐增加，各时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。但在第168h，钛合金颗粒干预组成骨细胞增殖活性低于对照组和96h实验组，差异有统计学意义(P<0.01)。　　2.实验3结果显示在第0.5h，1h，6h三个时间点，钛合金颗粒(0.1g/L)共培养组ERK1/2磷酸化水平均较对照组高，差异有统计学意义(P<0.01)，其中0.5h亚组成骨细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平最高；但第3h时间点，两组ERK1/2磷酸化水平的差异无统计学意义(P>0.05)。不同浓度钛合金颗粒共培养的结果显示，不同浓度钛合金颗粒组成骨细胞的ERK1/2磷酸化水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。　　3.实验4　　ELISA法结果显示：　　RANKL蛋白的表达：在不同浓度钛颗粒共培养24h后，A组、B组和C组成骨细胞RANKL蛋白的表达量较对照组明显增加，分别为A组：2520.5±100.82 ng/L、B组：3398.6±284.40 ng/L、C组：4698.2±276.79 ng/L和对照组：204.8±23.95 ng/L，差异有统计学意义(P<0.01)。共培养48h后，A组、B组和C组成骨细胞RANKL蛋白的表达进一步增加，分别A组：3566.1±251.58ng/L、B组：4536.1±259.14 ng/L和C组：6005.9±323.71ng/L，与对照组(261.8±34.44 ng/L)相比差异有统计学意义(P<0.01)；而且随着钛合金颗粒浓度的增加，蛋白表达量越高，各组间差异有统计学意义(P<0.01)。PD98059干预组成骨细胞RANKL蛋白的表达显著低于无PD98059干预组，差异均有统计学意义(P<0.01)。　　OPG的分泌量：在不同浓度钛颗粒共培养24h后，A组、B组、C组成骨细胞OPG的分泌量分别是341.9±21.12 ng/L、394.8±21.69 ng/L、370.3±26.41ng/L，和对照组(212.7±13.71 ng/L)相比差异有统计学意义(P<0.01)；共培养48h后，A组、B组、C组OPG的分泌的量分别是436.1±12.29 ng/L、487.3±31.94ng/L、456.8±32.40 ng/L与对照组(279.6±22.18 ng/L)相比亦增加，差异有统计学意义(P<0.01)。PD98059干预组成骨细胞OPG蛋白的分泌量较无PD98059干预组显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)。　　RANKL/OPG比值：各时间点，A组、B组和C组RANKL/OPG比值较对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；PD98059干预组RANKL/OPG比值较无PD98059干预组显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)。　　RT-PCR检测结果显示：不同浓度钛颗粒共培养24h、48h后，各组成骨细胞均有RANKL、OPG基因的表达；在各时间点A组、B组和C组成骨细胞RANKL和OPG基因的表达、以及RANKL/OPG比值均较对照组显著增加，差异有统计学意义(P<0.01)。PD98059干预组成骨细胞RANKL、OPG基因的表达、以及RANKL/OPG比值均低于无PD98059干预组，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。　　结论：本实验条件下：　　1.钛合金颗粒可降低成骨细胞增殖活性，其作用与钛合金颗粒浓度和作用时间相关。　　2.不同浓度钛合金颗粒可促进成骨细胞RANKL、OPG的表达，尤其是RANKL的表达，同时也能上调RANKL/OPG的比值。　　3.不同浓度钛合金颗粒可促进成骨细胞ERK蛋白磷酸化水平，激活ERK信号通路。ERK信号通路抑制剂PD98059可抑制OPG的表达和RANKL的表达，降低RANKL/OPG比值，提示ERK1/2信号通路参与调节钛合金颗粒诱导的成骨细胞RANKL、OPG的表达。