背景及意义:胃癌是严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一，发病率位居所有恶性肿瘤的第二位，死亡率列所有恶性肿瘤的第三位，目前临床上大多数患者确诊胃癌时已是中晚期，根治性手术仍然是胃癌的主要治疗方式，也是唯一有希望治愈胃癌的手段，但手术效果不佳，直接影响愈后。因此深入研究胃癌发生、发展的分子机制，可为胃癌早期诊断提供依据，同时也为临床治疗提供有效的靶点治疗，具有重要的临床意义。肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(Tumor necrosisfactor-α induced protein-8，TIPE，TNFAIP8)是调控凋亡过程的重要分子之一。TIPE蛋白在细胞凋亡、信号传导、肿瘤细胞增生、侵袭及转移等生命过程中具有重要的调节作用。本实验研究通过在细胞水平和分子水平上检测TIPE蛋白及mRNA在胃癌组织中的表达，并分析它们与胃癌临床病理特征的关系，探讨TIPE与胃癌生物学行为的关系，分析TIPE对胃癌生长的影响。　　方法:第一部分:(1)利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测46例胃癌组织及癌旁正常组织中TIPE mRNA的表达，并对条带灰度检测分析不同组织TIPE mRNA的表达情况。(2)免疫组化S-P法检测胃癌组织及癌旁正常组织中TIPE蛋白的表达，根据RT-PCR灰度分析及免疫组化结果，结合临床病理资料，分析TIPE在胃癌发生、发展以及浸润、转移的关系。　　第二部分:(1)我们实验室已构建TIPE-shRNA-pSIREN-RetroQ干扰质粒和pSIREN-RetroQ阴性对照质粒，利用shRNA技术转染BGC823细胞干扰TIPE蛋白的表达。BGC823细胞稳定转染TIPE-shRNA-pSIREN-RetroQ干扰质粒（干扰组），BGC823细胞稳定转染pSIREN-RetroQ（阴性对照组），正常BGC823胃癌细胞（空白组）。应用蛋白免疫印迹方法(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法鉴定转染效果，(2)应用抗DR5单链抗体aDR5ScFv刺激后通过细胞流式术、台盼蓝染色、MTT实验检测TIPE不同表达的BGC823细胞的生长及凋亡情况，Western blot检测凋亡蛋白caspase-8、caspase-3、caspase-9的活化，进而探讨TIPE在胃癌细胞生长中的作用。　　第三部分:(1)应用TIPE不同表达的BGC823细胞株，接种于裸鼠右腋旁建立裸鼠胃癌移植瘤模型，(2)每天应用aDR5ScFv单链抗体治疗并测量裸鼠体重及肿瘤大小，治疗两周后摘取肿瘤称重，肿瘤组织经HE染色和TUNEL染色分析TIPE对胃癌生长的影响，对凋亡诱导剂的敏感性。　　结果:胃癌组织和癌旁正常组织中TIPE蛋白均有表达，TIPE mRNA在胃癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.05)，两者差异显著，具有统计学意义，TIPE mRNA与胃癌分化程度、淋巴结转移、TNM相关(P＜0.05)，与性别、年龄无关(P＞0.05)。　　利用TIPE不同表达的胃癌BGC823细胞株，经MTT检测发现，当aDR5ScFv的浓度分别为40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml、320ug/ml作用细胞8h后，干扰组细胞的生长抑制率分别为:33.73±1.79％、53.51±3.36％、67.30±1.47％，95.16±0.34％。而空白组细胞的生长抑制率分别为:21.92±1.66％、47.45±2.99％、56.67±4.59％、82.20±0.56％，阴性对照组细胞分别为:18.63±3.01％、41.64±1.78％、56.74±0.76％、85.26±1.15％，干扰组显示较强的细胞生长抑制作用，与其他两组相比，差异显著(P＜0.05)。应用台盘兰染色检测0.1mg/ml aDR5ScFv作用三组细胞12h、24h、36h的细胞死亡率。其中，干扰组为32.20±3.20％、45.33±2.35％、68.73±4.74％，空白组为21.30±1.41％、36.73±3.71％、60.33±1.83％，阴性对照组为19.73±1.42％、40.67±0.98％、53.17±1.79％，干扰组显示较多的细胞死亡率，与其他两组相比，差异显著具有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞术分析结果显示各组细胞的凋亡率不同，其中，空白组19.40％，阴性对照组17.98％;干扰组31.68％。以上结果提示TIPE被干扰后提高了BGC823细胞对aDR5ScFv诱导细胞凋亡的敏感性。通过蛋白免疫印迹方法(Western blot)发现干扰组caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化增强，提示TIPE低表达可以通过增强caspase活化提高BGC823细胞的凋亡敏感性。　　体内实验观察到，干扰组与空白组相比，aDR5ScFv作用不同TIPE表达的细胞建立的肿瘤模型，肿瘤生长呈不同的特点，干扰组14天肿瘤质量与体积分别为（0.008±0.002g，94.987±24.287mm3），阴性对照组裸鼠肿瘤质量与体积分别为（0.016±0.003g，178.387±8.083mm3），组间差异显著，具有统计学意义。　　生理盐水作用干扰组14天肿瘤质量与体积分别为（0.019±0.004g，232.586±31.632mm3），阴性对照组14天肿瘤质量与体积分别为（0.026±0.003g，252.825±34.883mm3）组间差异显著(P＜0.05)，具有统计学意义。而各组裸鼠体重变化无明显差异(P＞0.05)，无统计学意义。提示转染细胞安全可用。　　aDR5ScFv作用干扰组，HE染色结果显示肿瘤组织坏死明显，肿瘤细胞之间可见较多片状坏死及淋巴细胞浸润，肿瘤周围见片状坏死区。肿瘤组织的TUNEL染色显示，aDR5ScFv作用干扰组肿瘤组织可见较多绿色荧光，提示降低TIPE的表达可以增加BGC823细胞对aDR5ScFv诱导的凋亡敏感性。　　结论:TIPE能够促进胃癌细胞的增殖，干扰TIPE的表达可以增强胃癌细胞的凋亡敏感性。提示:TIPE可能参与了胃癌的发生、发展。TIPE可能为进一步研究胃癌的发病机制提出一种新的思路。