野黍对ALS抑制剂类除草剂抗药性研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zxhllgl1314
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野黍(Eriochloa villosa)是常见于辽宁省内玉米、大豆田的禾本科杂草,因其种子质量大,传播距离短,使其在田间富集形成野黍种子库,导致其第二年的发生基数增加,对粮食的生产危害严重。烟嘧磺隆(nicosulfuron)是一种高效、低毒的磺酰脲类除草剂,通常被作为苗后处理剂使用,保护粮食作物免受杂草侵害。本研究以辽宁省内29个野黍种群作为研究对象,对野黍种子的萌发条件展开探究,检测不同的野黍种群对烟嘧磺隆的抗药性水平,对野黍的ALS基因序列进行拼接与分析并对离体条件下野黍ALS活性进行测定,初步探究野黍的非靶标抗药性的机理,为指导科学合理的施用烟嘧磺隆及延缓野黍对其产生抗药性提供试验依据,主要研究结果如下:采取多种方法打破新采集野黍种子休眠状态,提升其萌发率。结果发现使用50℃的温水浸种12 h后萌发率为36.90%,选用100 g/L硫酸浸种12 h萌发率为37.60%,50mg/L的硝酸钾浸种12 h时萌发率为24.60%。三种处理方法对解除种子休眠实际效果较差,而选用300 mg/L赤霉素浸种12 h时,能大幅度提升野黍种子的萌发率,其萌发率为62.15%。对采集的29个野黍种群的抗药性水平进行测定,有28个种群对烟嘧磺隆产生了不同水平的抗药性,其中包含4个高水平抗药性种群,11个中水平抗药性种群,13个低水平抗药性种群和1个敏感性种群。采集的野黍种群GR50范围在4.54~81.36 g a.i./hm~2,抗性指数的范围为2.7~17.9,其中沈北新区种群CG1的抗性指数最大。利用分子拼接技术,首次得到了野黍的乙酰乳酸合成酶(ALS)基因序列。结果显示,拼接得到的野黍ALS基因DNA序列总长共计1479 bp,编码氨基酸共计493个。对采集到的野黍种群ALS基因进行了扩增与克隆,并比对了抗性种群和敏感种群的基因序列。结果表明,采集的野黍种群在已报道的8个编码氨基酸位点均未出现突变,这也说明野黍对烟嘧磺隆产生抗药性的原因并不是靶标基因的氨基酸发生了突变。通过对靶标酶ALS离体活性测定,结果显示,抗性与敏感种群野黍在未施用烟嘧磺隆时,两者ALS活性差异较小,随着烟嘧磺隆的浓度增加,抗敏种群的ALS活性均呈下降趋势,但两者无显著差异,RI均低于2,这说明烟嘧磺隆对野黍抗敏种群的ALS活性影响基本一致,再次印证辽宁省野黍对烟嘧磺隆产生抗药性的原因与靶标抗药性无关。联合施用P450s抑制剂马拉硫磷与烟嘧磺隆,分析马拉硫磷对烟嘧磺隆的增效作用。试验结果表明,野黍种群经喷施马拉硫磷后,与单独喷施烟嘧磺隆相比,抗性种群的GR50值显著下降,其中种群XJ1、LZK、LY1和CG1的抗性指数比分别为1.80、2.10、2.20和2.52,敏感种群NY1的GR50值下降不显著。证明抗性野黍种群的P450s活性比敏感种群强,野黍对烟嘧磺隆产生的抗药性是由于P450s活性增强所导致。通过测定不同野黍种群的GSTs活性,结果显示,在施药后抗性野黍种群CG1、XJ1、LZK和LY1的GSTs活性均高于敏感种群NY1。施药后3 d内抗敏种群的GSTs活性均呈上升趋势,在施药3~7 d呈下降趋势,但抗性种群GSTs活性均显著高于敏感性种群。这说明野黍种群对烟嘧磺隆的抗药性可能与GSTs活性增强有关。
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