大豆疫霉侵染大豆引起的大豆疫霉病是大豆生产上的毁灭性病害之一,也是我国的A1类检疫对象。大豆疫霉病原菌的卵孢子主要通过黏附在种子表面以及混杂在种子里的土壤颗粒进行传播,也可通过带病种子传播。因此,建立大豆疫霉菌快速准确的分子检测方法,不仅对我国与其他国家的大豆贸易至关重要,而且对控制大豆疫霉病在我国的传播也是必不可少的。本研究用真菌18S-28S间的内转录间隔区(ITS)通用引物ITS1/ITS4扩增大豆疫霉菌和其它外群真菌的基因组DNA ,并克隆测序。得到的序列与GenBank中疫霉属其它种及相关种的ITS序列比对,利用DNAMAN软件构建了系统发育树,并设计出了检测大豆疫霉菌的特异性引物BJF/R。引物的特异性验证表明该对引物只能从大豆疫霉中扩增得到一650 bp的特意条带,该对引物对大豆疫霉纯基因组DNA的灵敏度检测可达到0.1 fg。本研究根据大豆疫霉菌与相关真菌ITS序列差异,设计出了对大豆疫霉具有稳定点突变的特异性引物Ps-1,Ps-2和TaqMan探针Ps-Probe。通过优化反应体系和条件,建立了针对大豆疫霉菌的TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。该探针除大豆疫霉菌能检测到荧光信号增强外,其它菌株都无荧光信号增强;该探针对大豆疫霉纯基因组DNA的灵敏度检测可达到0.01 fg,比常规PCR高100倍。本研究根据大豆疫霉菌可溶性蛋白的特异性,建立了鉴定该菌的SDS-PAGE检测方法。根据SDS-PAGE可以直接鉴定出该菌,为植物检疫部门提供了一种快速准确的检测方法。本研究建立的三种分子检测方法,可以直接用于植株中,夹带土壤中以及大豆种子中大豆疫霉菌的快速检测。这三种方法为口岸大豆疫霉菌的检验检疫提供了理论依据和技术保障,也为大豆生产和贸易往来提供了技术支持。