维药雪菊黄酮部位的富集工艺及化学表征研究

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雪菊为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊Coreopsis tinctoria Nutt的干燥头状花序,又名新疆昆仑雪菊,具有清热解毒、活血化瘀、和胃健脾之功效。近年来,雪菊因防治心血管疾病的疗效显著,被广泛应用。现代药理学研究发现,雪菊中的黄酮类成分能够非常显著地抑制前脂肪细胞3T3-L1的增殖和分化,且能够明显改善高脂饲料引起的小鼠血清胆固醇含量升高及HDL-C水平降低,降低小鼠肝脏脂质水平,从而起到很好的降脂效果。因此雪菊的黄酮类成分很可能是其防治高血脂症的重要药效物质。但至目前,雪菊黄酮有效部位的化学成分研究尚属空白,所以本课题拟对雪菊黄酮有效部位进行有效富集并对其化学表征进行研究,主要包括以下三个方面的内容。1.本研究采用单因素法结合正交试验法对雪菊药材提取工艺及雪菊中黄酮部位的富集工艺进行考察和筛选;建立了雪菊药材提取工艺及雪菊中黄酮部位的富集工艺。雪菊药材的最佳提取工艺为:取适量雪菊药材,粉碎过二号筛,置于蒸发皿中,加入2倍量50%乙醇溶液浸润,搅拌均匀,密闭放置2h,后层层铺平装入渗漉器中,再加入40倍量50%乙醇溶液,浸泡24h后开始渗漉,流速为3mL/min。黄酮部位最佳富集工艺为:采用AB-8大孔树脂柱色谱富集黄酮部位,最大上样量为3.5BV比重为0.0987g/mL的原药材提取液,洗脱溶剂为60%甲醇,装柱径高比为1:10,洗脱流速为3BV/h。2.本研究采用常压柱色谱法结合制备型高效液相色谱法对雪菊中主要的黄酮类成分进行分离及纯化,最终分离得到两个主要成分:二氢马里苷和马里苷。3.本研究采用TLC、HPLC及HPLC-MSn技术对雪菊黄酮部位成分进行表征研究和色谱峰归属。经过对TLC、HPLC指纹图谱条件的筛选、优化,建立了雪菊黄酮部位的单向薄层指纹图谱、双向薄层指纹图谱及HPLC指纹图谱,并采用HPLC-MSn技术对指纹图谱中各峰进行检测和分析,通过对质谱裂解规律的探讨及与相关文献对照,鉴定了雪菊黄酮部位中11个主成分,为雪菊防治冠心病的药效物质基础研究提供了有效的参考。
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