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一、临床研究目的:基于患者检查生化指标,预测心阴片的临床疗效及分析筛选心阴片适用人群。方法:该研究主要收集近2年来因为慢性心衰（HF Chronic heart failure）收住我院心内科的病人,对气阴虚血瘀水停型患者采集其病史、收集其住院期间的理化等辅助检查,进行回顾性研究,结合辅助检查归纳气阴虚血瘀水停型患者特征,对其进行支持向量机,决策树分析,特征性分析,对心阴片适用患者进行监督学习模型预测。结果:NYHA分级对诊断气阴虚血瘀型心衰患者敏感性高,ROC曲线下面积AUCNYHA=0.73,NYHA敏感性80%,特异性62%,LVEF AUCEF=0.64,敏感性55%,特异性62%。气阴虚血瘀水停型患者中心功能Ⅱ级,BNP>24.7pg/mL,TC≤5.29 mmol/L,有效率5%。心功能Ⅲ/Ⅳ级,LDL-C≤2.53mmol/L,有效率 88%。心功能Ⅳ级,EF>32,有效率 95%。EF>74,有效率 8%。心功能Ⅲ/Ⅳ,年龄≤76 岁,EF≤74,BNP≤ 1798pg/mL,HCY>15.7umol/L患者有效率100%。女性心功能Ⅲ/Ⅳ,年龄≤76岁,EF≤74,TG<1.63mmol/L,HCY≤15.7umol/L且服药时间小于30天患者有效率为0。男性心功能Ⅳ,年龄≤76岁,EF≤71,TG>0.64mmol/L,HCY≤15.7umol/L患者有效率13%。HF≤74,年龄>76岁患者有效率98%。结论:心功能Ⅱ级以上（不包括Ⅱ级）,伴有高同型半胱氨酸血症的气阴虚血瘀水停型患者更适合服用心阴片。二、实验研究（一）UPLC-MS法测定心阴片中9个指标性成分的含量目的:建立同时测定心阴片中9个指标性成分（京尼平苷酸、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-0-β-D-龙胆双糖苷、益母草碱、人参皂苷Rg,、人参皂苷Rb,、黄芪甲苷、毛冬青皂苷甲、麦冬皂苷D、冬青素A）含量的UPLC-MS法。方法:采用 Waters ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱（1.8 μm,2.1 mm × 100 mm）,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,体积流量为0.4 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL。质谱采用电喷雾电离离子源,在负离子模式下检测,扫描范围为m/z 100～1350。结果:京尼平苷酸、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-0-β-D-龙胆双糖苷、益母草碱、人参皂苷Rg,、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、毛冬青皂苷甲、麦冬皂苷D、冬青素A分别在2.3～2300.0、1.6～400.0、4.7～1800.0、2.9～2300.0、3.3～3400.0、1.7～200.0、2.2～2000.0、3.1～200.0、1.9～1800.0 ng/mL 范围内的线性关系良好（r>0.999 0）;精密度、重复性、稳定性的RSD均小于2.00%;平均加样回收率和RSD分别在97.50～101.90%和 0.81～2.81%范围内。结论:UPLC-MS法简便、快速、准确,可以为心阴片的质量控制提供参考。（二）MLK3/JNK-自噬机制介导慢性心衰小鼠心肌纤维化的研究目的:探讨MLK3/JNK-自噬在心衰小鼠心肌纤维化的作用及分子机制方法:SPF级C57雄性小鼠75只,8周龄,除假手术组外,其余均构建TAC模型,建立慢性心衰小鼠模型,将HF小鼠随机分为四组,HF组、MLK3抑制剂组（URMC099）、自噬抑制剂组（3MA）、雷帕霉素（RAPA）自噬诱导剂组。模型成功一周后予腹腔注射相应容积和药物30天。30天后行心脏超声检查,取材通过心脏石蜡切片,masson染色,WGA染色,免疫组化,免疫荧光,观察心肌细胞形态学变化及心肌纤维化程度。观察抑制剂 URMC099,3MA 对 MLK3、P-MLK3、JNK、P-JNK,LC3、Beclin-1、Lampl 自噬蛋白,Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、α-SMA纤维化蛋白、基因表达情况。结果:1.抑制MLK3有效抑制自噬,改善心功能。与control组比较,RAPA组和HF组小鼠心脏LVEF、FS明显降低,LVDd、LVDs明显升高（P<0.05）。与HF组比较,URMC组,3MA组,LVEF、FS明显升高,LVDd、LVDs相对降低（P<0.05）2.抑制剂URMC099,3MA能明显抑制BNP、ANP基因的表达。与control 比较HF组BNP、ANP水平明显升高（P＜0.01）;MLK3抑制剂组,3MA抑制剂组与HF组比较BNP、ANP水平明显降低（P<0.05）3.抑制剂URMC099、3MA有效阻止了其心脏肥大,减轻了心肌纤维化。与control组相比,HF组心脏重/体重比值明显升高（P<0.05）,与HF组比MLK3、3MA抑制剂组比值降低（P<0.05）;与control组比较,HF组心肌纤维化程度明显加重（P<0.01）,与HF相比,MLK3、3MA组心肌纤维化程度明显减轻（P<0.01）;与control组相比,HF组心肌细胞表面积大（P<0.05）;与HF组比MLK3、3MA抑制剂组细胞表面积减小（P<0.05）。4.抑制剂URMC099、3MA 能抑制 MLK3、P-MLK3、P-JNK 蛋白,自噬蛋白 LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、Lampl,心肌纤维化相关蛋白 COll-Ⅰ、COll-Ⅲ、α-SMA 的表达。与 control组比较,HF组小鼠心肌组织中MLK3、P-MLK3、P-JNK也随之上调（P<0.05）,与此同时与自噬活动相关的LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、Lampl表达显著上升（P<0.05）,与心肌纤维化表达相关的Coll-Ⅰ、COll-Ⅲ、α-SMA胶原蛋白的表达同步上调（P<0.05）。与HF组相比,MURMC组,3MA组MLK3、P-MLK3、P-JNK蛋白,自噬标志性蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、Lampl表达显著下调,心肌纤维化相关蛋白Coll-Ⅰ、COll-Ⅲ、α-SMA胶原蛋白的表达下调（P<0.05）。5.抑制剂LRMC099、3MA能有效抑制小鼠心肌组织COll-Ⅰ、COll-Ⅲ、α-SMA基因的表达。与control组比较,HF组Coll-Ⅰ、Coll-Ⅲ、α-SMA表达上调（P<0.05）;与HF组比URMC组,3MA组Coll-Ⅰ、Coll-Ⅲ、α-SMA基因表达均下调（P<0.05）。结论:MLK3/JNK通过下调自噬改善慢性心衰小鼠心功能减缓心肌纤维化。（三）心阴片对慢性心衰小鼠心肌纤维化防治的研究目的:观察心阴片是否通过调控MLK3/JNK-自噬机制防治心衰小鼠心肌纤维化方法:SPF级C57雄性小鼠90只,8周龄,除假手术组外,其余均构建TAC模型,建立慢性心衰小鼠模型,将HF小鼠随机分为五组,HF组、心阴片高、中、低剂量组,培垛普利组（Perindopril PDPL）。模型成功一周后给予相应的容积和药,连续给药60天后行心脏超声检查,取材通过心脏石蜡切片,masson染色,观察心肌纤维化变化。心阴片对小鼠心肌组织中MLK3、P-MLK3、JNK、P-JNK,LC3、Beclin-1、Lampl自噬蛋白,Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、α-SMA纤维化蛋白和基因表达情况。结果:1.心阴片高、中剂量能有效改善心衰后小鼠心功能。与control组比较,HF组小鼠心脏LVEF、FS明显降低,LVDd、LVDs明显升高（P＜0.05）。与HF组比较,培哚普利组、心阴片高、中剂量组,LVEF、FS明显升高,LVDd、LVD相对降低（P<0.05）。与HF组比较,心阴片低剂量组（xyp0.3g/Kg）心脏LVEF、FS、LVDd、LVDs改善不明显（P>0.05）。2.心阴片高、中剂量组,培哚普利组可改善心衰后小鼠心肌纤维化。HF组与control组比较心肌纤维化程度明显加重（P<0.01）,与HF组相比,心阴片高、中剂量组、培哚普利组心肌纤维化程度明显减轻（P＜0.01）;与HF组相比,低剂量组心肌纤维化程度改善不明显（P>0.05）。3.心阴片能通过抑制MLK3/JNK,有效抑制自噬改善心肌纤维化。与control组比较,HF组MLK3/JNK,P-MLK3,P-JNK蛋白表达上调（P<0.05）。与HF组比较培垛普利组、心阴片高、中剂量组MLK3/JNK,P-MLK3,P-JNK蛋白表达下调（P<0.05）。与control组比较,HF组LC3、Beclin-1、LAMP1蛋白表达上调（P<0.05）。与HF组比较培垛普利组、心阴片高、中剂量组LC3、Beclin-1、LAMP1蛋白表达下调（P<0.05）。与control组比较,HF组α-SMA、collagen Ⅰ、CollagenⅢ胶原蛋白表达明显升高（P<0.01）;与HF组比较,培垛普利组、心阴片高、中剂量组α-SMA、collagen Ⅰ、collagenⅢ蛋白表达下调（P<0.05）。4.心阴片能够抑制BNP、ANP基因的表达。与control组相比,HF组BNP、ANP表达上调（P<0.01）。与HF组比较培垛普利组、心阴片高、中低剂量组BNP、ANP表达下调（P<0.05）。5.心阴片能够抑制Coll-Ⅰ、Coll-Ⅲ、a-SMA基因的表达。与control组相比,HF组Coll-Ⅰ、Coll-Ⅲ、a-SMA基因表达上调（P<0.01）。与HF组比较培垛普利组、心阴片高、中、低剂量组Coll-Ⅰ、Coll-Ⅲ、a-SMA基因表达下调（P<0.05）。结论:心阴片高、中剂量组能够改善心衰小鼠心功能,并通过调控MLK3/JNK-自噬机制改善心衰小鼠心肌纤维化。