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猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）和猪细小病毒（Porcine Parvovirus， PPV）是引起猪繁殖障碍性疾病的常见病原，可引起母猪流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱胎等。纳米PCR是一种新型PCR技术，近年来，该技术开始应用于动物疫病的检测，取得了较为理想的检测效果。基于纳米 PCR技术检测敏感性高、特异性好的特点，本研究拟开展PRV和PPV纳米PCR检测方法的研究。本文主要从以下三个方面开展了相关研究： 试验一猪伪狂犬病毒纳米PCR检测方法的建立 根据GenBank上发表的PRV gB基因序列设计一对目的条带大小为338 bp的特异性引物，建立PRV纳米PCR检测方法。结果表明，PRV纳米PCR方法的最低检出限为10拷贝/μL，是普通PCR检测方法的100倍；纳米PCR可以提高PCR的特异性，普通PCR扩增时会出现一条约200 bp的非特异性条带，而纳米 PCR时，未出现此非特异性条带；与猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒等常见猪病毒性病原均无交叉反应；重复性较好。 试验二猪细小病毒纳米PCR检测方法的建立 为了建立PPV纳米PCR检测方法，根据GenBank上发表的PPV NS1基因序列设计一对检测引物，条带大小为268 bp。结果表明，PPV纳米PCR方法的最低检出限为25拷贝/μL，是普通PCR检测方法的100倍；纳米PCR可以提高PCR的特异性，普通PCR扩增时在目的条带下方会出现一条微弱的非特异性条带，而纳米 PCR时，未出现此非特异性条带；与猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒等常见猪病病原及新型猪细小病毒病PPV2、PPV3、PPV4、猪博卡病毒无交叉反应；重复性较好。 试验三猪伪狂犬病毒与猪细小病毒纳米双重PCR检测方法的建立 本试验应用实验一与实验二的检测引物建立PRV与PPV纳米双重PCR检测方法。结果显示，应用纳米双重PCR方法进行检测，PRV的最低检出限为10拷贝/μL，PPV的最低检出限为25拷贝/μL；与猪圆环病毒Ⅱ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、经典猪瘟病毒、H1亚型猪流感病毒及口蹄疫病毒及新型猪细小病毒病PPV2、PPV3、PPV4、猪博卡病毒均无交叉反应；重复性较好。运用本方法、PRV诊断国家标准GB/T18641-2002（简称“国标”）中的PCR方法及PPV出入境检疫行业标准SN/T1847-2007（简称“出入境行标”），分别对来自于不同地区发病猪场的148份临床样品进行平行检测。纳米双重PCR和PRV国标PCR方法对PRV的阳性检出率分别为49.3％和23.6%；纳米双重PCR和PPV出入境行标PCR方法对PPV的阳性检出率分别为2.0%和1.4%。国标或行标检测为阴性而纳米双重PCR检测为阳性的PRV和PPV样品均经测序确认。结果表明，本研究所建立的纳米双重 PCR方法特异、敏感，在临床样品的检测中较现行标准表现出更高的敏感性。