【摘 要】
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目的:寻找移植静脉重塑中PCNA的配体蛋白。方法:我们在前期实验通过免疫组化和Western-blotting等发现PCNA的表达在术后1d呈最低值,术后7d呈峰值。证实了移植静脉桥在术后1d
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目的:寻找移植静脉重塑中PCNA的配体蛋白。方法:我们在前期实验通过免疫组化和Western-blotting等发现PCNA的表达在术后1d呈最低值,术后7d呈峰值。证实了移植静脉桥在术后1d凋亡显著,在术后7d增殖明显,因此我们选择术后1d、术后7d和正常静脉组,建立动物模型,在术前、术后1d和术后7d取出标本,通过PCNA抗体免疫沉淀,获得生理条件下与PCNA相互作用的蛋白质,再用质谱定量分析技术对PCNA的配体蛋白进行差异分析,寻找特异性靶蛋白,并进行验证。结果:通过质谱分析共鉴定蛋白质组数1238个,肽段数5840个。蛋白质显著性分析发现与正常静脉组相比术后1d和术后7d差异蛋白数分别为30个和37个,术后1d和术后7d差异蛋白数为29个。术后1d和术后7d差异表达蛋白GO富集分析前15个注释中,氮代谢合成、细胞刺激反应富集度较高。KEGG富集度分析术后1d和术后7d中14-3-3蛋白主要集中在PI3K-AKT信号通路、Focal adhesion通路。我们通过Western-blotting验证发现,术后1d 14-3-3γ表达增加,术后7d 14-3-3γ表达减少,但高于正常对照组,14-3-3γ在术后1d表达明显增加,与急性损伤早期细胞修复有关,术后7d表达下降,与细胞急性损伤逐渐恢复,并进入增殖期有关。免疫荧光实验示14-3-3γ在术后1d表达呈高峰,术后7d、14d表达下降,但高于正常对照组,术后28d表达呈低水平,低于正常对照组。我们的免疫荧光实验证实了在术后1d急性损伤期14-3-3γ表达呈高峰,随着损伤的消退,移植静脉逐渐适应了动脉环境,14-3-3γ表达逐渐下降。结论:14-3-3γ是移植静脉重塑中PCNA配体蛋白,在移植术后急性期表达显著。
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