背景癌症(cancer)是一种全身消耗性疾病,尽管经过几十年的研究,在发达国家仍然是导致死亡的主要原因。然而就大多数肿瘤而言,单一的某种治疗方法,其疗效均不甚理想,多需要多种方法的综合治疗。化学治疗(化疗)是手术以外的重要治疗手段,然而其主要限制是无法区分健康细胞和肿瘤细胞,不可避免的会产生一系列的副作用,如恶心、呕吐、食欲减退、脱发、肝肾损伤、骨髓抑制,甚至会诱发癌变。因此,寻找到抗肿瘤效果佳、副作用低、耐受性好的药物及化疗方案是临床工作及科学研究的重点及热点。近些年,众多研究显示二-2-吡啶酮-4,4-二甲基-3-氨基硫脲(Dp44mT)具有广谱、高效的抗肿瘤活性。然而关于Dp44mT和顺铂的联合用药,特别是作用于人肝癌细胞株HepG2的研究及相关实验鲜有报道。本实验将对Dp44mT、顺铂两药单独以及联合用药对人肝癌细胞株HepG2的抑制情况及相关机制进行研究。目的探讨Dp44mT、顺铂及其联合用药对人肝癌细胞株的生长抑制情况,并研究其可能的作用机制。方法对人肝癌HepG2细胞株进行人工体外培养,待细胞处于对数生长期时进行实验,对实验进行分组:对照组、Dp44mT组、顺铂组、顺铂联合Dp44mT组。1.使用倒置显微镜观察细胞形态;以凋亡细胞琥珀酸脱氢酶活性检测法(MTT法)测肿瘤细胞(HepG2)的生长抑制率,并计数半数抑制浓度(IC50);2.体外活性氧方法评估Dp44mT、顺铂两药单独及联用时产生ROS能力;3.细胞内活性氧方法检测Dp44mT、顺铂两药单独及联用在HepG2细胞株内产生ros能力;4.单细胞电泳(彗星尾)法评估dp44mt、顺铂两药单独及联用对人肝癌细胞株hepg2细胞dna的损伤。5.运用流式细胞仪测得dp44mt、顺铂两药单独及联用对人肝癌细胞株hepg2细胞周期的影响。结果1.dp44mt、顺铂两药单独及联合应用均能明显抑制人肝癌hepg2细胞株的生长,且抑制作用与药物浓度呈正相关,与对照组相比,差异均有统计学意义(p<0.05);2.细胞外活性氧方法检测出dp44mt组、顺铂组、顺铂联合dp44mt组、dp44mt+vitc组、顺铂+vitc组、顺铂+dp44mt+vitc组均有产生细胞外活性氧的能力,且以顺铂+dp44mt+vitc组能力最强;3.细胞内活性氧方法检测出dp44mt组、顺铂组、顺铂联合dp44mt组均有产生细胞内活性氧的能力;且联合用药产生ros能力强于单独用药。4.单细胞电泳(彗星尾)法检测出dp44mt与顺铂单独用药组均有彗星尾出现,且联合用药生产彗星尾最长、头最小;5.顺铂单独用药可使人肝癌hepg2细胞株细胞周期停滞在g1期;dp44mt单独用药可使人肝癌hepg2细胞株细胞周期停滞在s期;两药联合应用可使人肝癌细胞株hepg2的细胞周期停滞在s期,顺铂可以增强dp44mt对细胞周期阻滞的能力,并且随顺铂浓度降低,dp44mt对细胞周期的抑制作用增强,成负相关关系。结论1.dp44mt、顺铂两药单独用药均能抑制人肝癌hepg2细胞株的生长,且抑制作用与药物浓度呈正相关,两药联用表现出协同或相加作用。2.dp44mt、顺铂两药单独和联合使用在细胞内外均能产生ros,且联合用药作用强于单独用药。它们引起的dna损伤与ros形成能力相关,表明它们对hepg2细胞的生长抑制是由ros介导的。3.顺铂单独用药可使人肝癌HepG2细胞株细胞周期停滞在G1期;Dp44mT单独用药可使人肝癌HepG2细胞株细胞周期停滞在S期;两药联合应用可使人肝癌细胞株HepG2的细胞周期停滞在S期,顺铂可以增强Dp44mT对细胞周期阻滞的能力,并且随顺铂浓度降低,Dp44mT对细胞周期的抑制作用增强,成负相关关系。总之它们的生长抑制作用于ROS及细胞周期停滞有关,表明它们的抗肿瘤活性涉及多种机制参与。