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由指状青霉(Penicillium digitatum)引起的绿霉病是柑橘果实最严重的采后病害。化学杀菌剂是目前控制绿霉病的主要方式,但存在容易诱导致病菌产生耐药性、对人类健康和环境会产生危害等不良影响。植物精油组分枯茗醛已被证实对多种食品致病菌具有很好的抑制作用,可以作为化学杀菌剂的替代物。本文初步探究了枯茗醛对指状青霉抑霉唑敏感菌株(Pds01)和抗性菌株(Pdw03)的离体及活体抑菌效果及浓度;测量了细胞壁和细胞膜完整性以及胞内活性氧含量的变化;定量分析了细胞总脂质和MDA含量与活性氧的关系;分析了细胞线粒体膜电位及能量代谢的变化与活性氧的关系。主要研究结果如下:1、枯茗醛对指状青霉敏感菌株(Pds01)和抗性菌株(Pdw03)抑菌性能的研究离体条件下,枯茗醛对指状青霉有较好抑制效果,对敏感菌株与抗性菌株最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)均分别为0.30和0.60μL/m L。活体实验发现,敏感菌株侵染果实第5d时,对照组发病率100±0%,5×和10×MFC枯茗醛处理组发病率分别为80±0%和65±5%;贮藏第7d,对照果实整果腐烂,病斑直径为72.67±2.52 mm,10×MFC枯茗醛处理组病斑直径为48.33±7.64 mm。抗性菌株柑橘绿霉病果实第6d时,对照发病率100±0%时,5×和10×MFC枯茗醛处理组发病率分别为82±8%和63±3%,贮藏第8d时,对照组整果腐烂且病斑直径为64±3.61 mm,10×MFC枯茗醛处理组病斑直径仅为32.10±1.05 mm。以上结果表明10×MFC枯茗醛能有效降低敏感及抗性菌株绿霉病发病率,控制病害的发生。扫描电镜(SEM)结果显示,枯茗醛处理导致指状青霉敏感及抗性菌丝体的表面形态均发生严重干扁、扭曲、褶皱。2、枯茗醛对指状青霉敏感菌株(Pds01)和抗性菌株(Pdw03)的抑菌机理研究1/2 MIC枯茗醛处理敏感及抗性菌株后,细胞壁均未受影响;细胞膜均出现损伤,敏感菌株发生在60 min,而抗性菌株在30 min已损伤;胞内活性氧(ROS)含量的增加均在30 min时出现,但抗性ROS荧光倍数数值为1.46±0.10高于敏感1.13±0.04,说明枯茗醛诱导抗性菌株胞内ROS的积累比敏感菌株更快。总脂质含量随着时间逐渐降低,MDA含量逐渐升高,外源添加ROS清除剂Cys和抑制剂DPI后其细胞膜损伤显著降低,表现在PI染色实验荧光强度、总脂质含量、MDA含量基本与对照接近,使用扫描电镜(SEM)观察其表面形态发现未见明显损伤。外源添加Cys和DPI后测量了敏感及抗性菌株线粒体膜电位的变化,120 min时,敏感菌株1/2 MIC CU处理组红绿荧光比为0.650±0.052,显著低于外源添加Cys处理组(0.782±0.040)和外源添加DPI处理组(0.904±0.053);对抗性菌株线粒体膜电位,外源添加Cys与DPI处理组荧光比值分别为1.025±0.040与1.235±0.017高于1/2 MIC CU处理组的0.909±0.028。测量了胞内能量物质含量的变化,发现与线粒体膜电位变化规律一致。实验结果表明枯茗醛诱导的活性氧产生的主要位点在线粒体且与能量代谢、呼吸代谢有关。综上所述,本研究表明枯茗醛对柑橘采后绿霉菌有较好的抑制作用,其作用机制主要与细胞膜损伤、胞内能量代谢失衡、线粒体功能异常和胞内ROS的大量爆发有关,本研究可为植物精油应用于柑橘采后防腐保鲜提供理论依据。