人PRL-3基因的克隆表达及蛋白纯化

来源 :内蒙古医学院 内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaoyaoyang22
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目的:从人结肠癌肝转移病灶标本中提取总RNA,PCR扩增PRL-3基因,并在大肠杆菌中表达并纯化表达蛋白。 方法:收集人结肠癌肝转移标本,提取总RNA,逆转录为eDNA,PCR扩增目的序列,T-A克隆于pMD-18T载体中,转化大肠杆菌JM109株,提取质粒,重组质粒进行PCR、酶切鉴定,经双酶切后的PRL-3片段再次连接至原核表达载体pQE-31,并转化大肠杆菌JM109,筛选pQE-31-PRL-3重组质粒,经PCR、酶切与测序等方法鉴定序列正确性,阳性重组质粒在大肠杆菌中表达后,纯化表达蛋白。 结果:通过酶切、PCR与测序三种方法证实所获得的基因片断为PRL-3基因,并在大肠杆菌中获得表达并加以纯化。 结论:克隆到序列正确的人源性PRL-3基因,并在大肠杆菌中实现PRL-3基因的表达及纯化,为制备相应抗体,开发诊断试剂,以及鉴定该基因家簇等相关的工作奠定了基础。
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