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目的:基于转录组测序结果分析骨癌痛大鼠背根神经节m RNA表达差异以及相关信号通路的改变。方法:将12只体重150-180g的清洁级雌性SD大鼠随机分为2组:假手术组（Sham组）和骨癌痛组（BCP组）,n=6。Sham组和BCP组大鼠右侧胫骨近端骨髓腔分别注射10μl D-hank’s液或MRMT-1乳腺癌细胞（3×107个/ml）。术前2天与术后4、7、11、14、17、21天分别用Von Frey纤毛测大鼠右后肢机械缩足阈值（mechanical withdraw threshold,MWT）;术后21天影像学观察大鼠胫骨骨质破坏情况;于术后21天取大鼠胫骨进行HE染色观察大鼠骨髓腔的肿瘤细胞浸润情况;同时取背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）进行RNA-Seq,检测m RNA的差异表达情况,并进行GO和KEGG分析,对差异基因可能富集的生物学功能进行分析;采用实时荧光定量PCR（q-PCR）方法验证显著上调及下调的基因表达情况。结果:术后11-21天,BCP组大鼠右后肢MWT明显下降（*P<0.05）,提示大鼠骨癌痛模型构建成功。与Sham组对照,以差异倍数大于1.5倍且FDR（false discovery rate）值小于0.05为条件,RNA-seq筛查到149个表达显著差异的m RNA,上调124个,下调25个,其中Nav1.6与Sham组相比上调22.4倍,位于上调基因前十。富集分析结果表明两组差异表达基因主要集中在细胞信号转导、生物学过程调节、炎症等生理病理过程及相关通路,其中MAPK通路作为重要信号转导通路,是KEGG富集分析中主要富集到的通路之一,与慢性疼痛的发生密切相关。q-PCR结果显示,BCP组与Sham组相比,LOC100911356、Ndst2基因表达升高,而Press29、Epyc、Fcrla基因表达下调,与转录组测序结果一致。结论:SD大鼠胫骨注射MRMT-1乳腺癌细胞可导致骨癌痛发生,其背根神经节中Nav1.6上调与MAPK信号通路发生改变。目的:研究MAPK信号通路对Nav1.6的调控在大鼠骨癌痛发生中的作用。方法:1.为了验证Nav1.6在骨癌痛大鼠中的表达差异,将12只雌性SD大鼠,体重150-180g,随机分为2组:Sham组和BCP组,n=6。建模方法同前,术后21天取大鼠DRG,通过q-PCR、Western Blot及免疫荧光检测大鼠DRG中Nav1.6的表达情况。并进一步研究DRG中Nav1.6敲低是否能缓解骨癌痛的发生,将84只150-180g雌性SD大鼠分为6组（n=14）:Sham组、BCP组、LV-NC组、sh Nav1.6#1组、sh Nav1.6#2组、sh Nav1.6#3组。其中sh Nav1.6#1、sh Nav1.6#2、sh Nav1.6#3组分别于骨癌痛建模术后第7-14d鞘内注射针对Nav1.6基因3个不同靶序列的慢病毒溶液（2×106TU/10μl）,LV-NC组相应的注射空载慢病毒溶液（10μl）。所有组均于术前2d及术后第4d、7d、11d、14d、17d、21d测量大鼠MWT（n=8）。术后14d每组各取6只大鼠DRG进行WB、PCR验证Nav1.6的表达情况。2.为了探究MAPK信号通路是否通过调控Nav1.6表达从而促进骨癌痛发生,我们检测Sham组与BCP组大鼠DRG中p38、JNK和ERK的磷酸化水平。随后将84只SD大鼠随机分为6个组（n=14）:Sham组、BCP组、BCP+SB203580（p38抑制剂）组、BCP+SP600125（JNK抑制剂）组、BCP+U0126（ERK上游MEK抑制剂）组、BCP+Vehicle组。建模后12-14d分别进行鞘内注射SB203580（2μg/10μl）、SP600125（20μg/10μl）、U0126（10μg/10μl）及溶剂（10μl）。术后14d给药前及给药后2、4、6、8h进行MWT测量。各组于第14d给药后4小时取6只大鼠DRG进行Western Blot检测p-JNK/JNK、p-ERK/ERK、p-p38/p38、Nav1.6的表达情况,q-PCR检测Nav1.6m RNA表达量,并通过免疫荧光检测Nav1.6与p-p38的共定位情况。结果:1.骨癌痛大鼠DRG中Nav1.6 m RNA和蛋白表达均升高（*P<0.05 vs Sham组）。2.与BCP组相比,sh Nav1.6#2组、sh Nav1.6#3组Nav1.6 m RNA和蛋白表达显著下调（#P<0.01 vs BCP组）,且机械缩足阈值下降较骨癌痛组明显缓慢。3.BCP组DRG中p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK均升高;BCP+SB203580组、BCP+SP600125组、BCP+U0126组中相应的p38、JNK、ERK蛋白磷酸化被抑制;但只有BCP+SB203580组出现骨癌痛大鼠机械痛阈的升高及Nav1.6表达显著降低。结论:大鼠背根神经节中p38 MAPK通路而非JNK、ERK通路激活,能够上调Nav1.6的表达,促进骨癌痛的发生。