目的：探索鸡源大肠杆菌对四环素类耐药的分子机制和四环素耐药基因(tet 基因)的传播扩散机制。根据CLSI2008推荐的方法,对临床分离32株鸡大肠杆菌针对四环素、多西环素等10种抗菌药物进行耐药表型检测；设计6对特异性引物分两组对32株分离菌进行ett基因的PCR检测,以代表性tetA和tetB基因组合的分离菌做供体菌,采用基因克隆方法研究tetA和tetB的基因环境：试验菌株为一株含tetA基因的大肠杆菌和一株含有tetB的大肠杆菌,用pBluescriptⅡSK(+)作为载体质粒,将质粒和载体质粒进行酶切：EcoRⅠ和Hind Ⅲ单酶切,然后用T4连接酶将二者酶切产物进行体外连接,克隆到感受态细胞DH5a中,用LB/AMP/DOX/X-gal/IPTG平板进行蓝白斑筛选,挑选白色菌落即为阳性重组质粒克隆株,酶切、电泳确认正确插入后,插入的目的片段用载体通用引物测序。用ERIC-PCR对32株分离菌进行基因分型,分析其克隆关系。结果：32株鸡源大肠杆菌中有25株含tet基因。用微量稀释法测定32株鸡源大肠杆菌对四环素、多西环素、头孢他啶、头孢噻呋、卡那霉素、阿米卡星、四环素、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星和环丙沙星10种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),结果显示84%(25/32)的菌株呈多重耐药性特点。32株大肠杆菌PCR检测表明,tetA基因检出25株,检出率为78%, tetB基因检出7株,检出率为22%,编号第27株菌,tetA和tetB同时存在,占总大肠杆菌的比例为3%。还有7株大肠杆菌未检测出任何tet基因,整体耐药基因检出率为84%。经测序分析,得到基因序列全长6159bp的tetA片段,和全长为3764bp的tetB片段。tetA片段基因从左到右依次为：tetA基因、反向pecM膜锚定蛋白基因、转座酶tnpA、转座酶tnpA、反向ib/A基因。含有tetB的片段从左到右以此为：tetB基因、反向tetR基因、假定蛋白、假定蛋白、假定蛋白。用Eric-PCR对32株分离菌进行基因分型,共出现15种基因型,分别描述为A、B、C、D、到0型,细菌基因型与耐药模式和携带四环素耐药基因型之间没有明显联系。