狂犬病（Rabies）是由高度神经嗜性的狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的一种烈性人兽共患传染病,人类及所有的温血动物均易感,病死率几乎达100%。每年全世界约有5.5万人死于狂犬病,现今狂犬病依然对世界特别是亚洲、非洲等地区的公众健康与安全构成严重威胁。RABV通常是经伤口或粘膜表面感染进入机体,病毒的复制始于被感染的肌肉细胞,病毒通过G蛋白结合到乙酰胆碱受体（acetylcholine receptors,AchR）和神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecules,NCAM）进入神经细胞,之后经运动终板和运动神经轴突以逆轴突方式进入中枢神经系统（central nervous system,CNS）,病毒在CNS中进行大量复制,最终引起致死性脑炎。为了阐释狂犬病病毒感染宿主后,在中枢神经系统中的分布、迁移情况及弱毒株被免疫系统清除的过程,本研究利用基于狂犬病病毒rHEP-Flury的反向遗传操作系统将红色荧光蛋白（red fluorescence protein,RFP）基因插入病毒基因组的假基因区,拯救出重组狂犬病病毒rHEP-RFP,通过细胞和小鼠感染实验研究该重组病毒的生物学特性,并初步探索病毒在感染小鼠脑内的分布和移行规律。通过对重组病毒rHEP-RFP的生物学特性研究表明,rHEP-RFP可以在BHK-21细胞上稳定地增殖,达到的病毒滴度略低于rHEP-GFP以及rHEP-Flury。抽取重组病毒的第10、20代的RNA进行RT-PCR扩增RFP基因并测序,基因并未发生突变。生长曲线表明,rHEP-RFP与rHEP-GFP、r HEP-Flury有着相似生长特性,72h达到高峰。rHEP-RFP在不同时间点的滴度低于亲本毒株rHEP-Flury以及rHEP-GFP。动物实验表明,重组病毒rHEP-RFP对乳鼠的LD₅₀为10^-5.428/0.03mL,颅内接种5-6周龄成鼠,对其没有致死性,rHEP-RFP影响成鼠体重的程度低于亲本毒株rHEP-Flury。全脑组织冰冻切片上可观察到在rHEP-RFP滴鼻感染小鼠的第7天能在大脑的颞叶沟回和海马回观察到红色荧光,第14天扩散到大脑皮层、小脑和脑干,第21天小脑和脑干几乎观察不到荧光,大脑区荧光也大幅减少。综上所述,本研究通过在狂犬病病毒中插入外源基因RFP,发现与亲本株相比,重组病毒rHEP-RFP在细胞增殖能力和对小鼠的致病力有所下降。滴鼻感染rHEP-RFP后,病毒较早出现在大脑的嗅觉中枢,之后扩散到小脑和脑干等部位,感染21天后小脑和脑干的病毒较先被清除完全。本研究构建的表达红色荧光蛋白的重组病毒rHEP-RFP为进一步研究RABV在中枢神经系统的扩散和清除机制提供便利的条件。