论文部分内容阅读
第一章儿童白血病WWOX、FHIT的mRNA表达研究目的：了解包含WW域的氧化还原酶(WW domain-containing oxidoreductase, WWOX)基因和脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad, FHIT)基因在儿童白血病中的表达,分析WWOX、FHIT基因与儿童白血病的关系；探讨WWOX与FHIT基因在儿童白血病中的发病机制。方法：收集2009年1月至2011年3月白血病的儿童51例作为白血病组,同期湖南省人民医院非白血病儿童10例作为对照组,检测两组儿童骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells, BMMCs)中WWOX和FHIT基因的mRNA表达。结果：1.白血病组的WWOXmRNA表达阳性率明显低于对照组(31.37% vs 100.00%,P<0.01)。2.白血病缓解组WWOXmRNA表达阳性率明显低于对照组(33.33%vs 100%,P<0.01)。3.白血病组WWOXmRNA表达阳性率在不同性别、年龄、白血病类型、治疗阶段、肿瘤负荷组别间无显著差异(P>0.05)。4.白血病组FHITmRNA表达阳性率明显低于对照组(54.90% vs100.00%,P<0.05)。5.白血病缓解组FHITmRNA表达阳性率为66.67%,对照组FHITmRNA表达阳性率为100.00%,两组间无明显差异(P>0.05)6.白血病组FHITmRNA表达阳性率在不同性别、年龄、白血病类型、治疗阶段组别间无显著差异(P>0.05)。7.高肿瘤负荷组FHITmRNA表达阳性率明显低于低肿瘤负荷组(33.33% vs 66.67%,P<0.05)。8.51例白血病儿童FHITmRNA与WWOXmRNA同时表达缺失的有15例。结论：1.WWOXmRNA、FHITmRNA在儿童白血病中低表达。2. WWOXmRNA表达阳性率在不同性别、年龄、白血病类型、治疗阶段、肿瘤负荷的白血病儿童间无差异。3.FHITmRNA表达阳性率在不同性别、年龄、白血病类型、治疗阶段的白血病儿童间无差异。4.高肿瘤负荷的白血病患儿FHITmRNA表达阳性率低于低肿瘤负荷患儿。第二章Zebularine对K562、Jurkat细胞WWOX、FHIT表达的影响目的：研究1-(β-D-呋喃核糖苷)-1,2-二氢嘧啶-2-酮(Zebularine, Zeb)干预K562和Jurkat后WWOX和FHIT的表达变化,分析zeb作用于WWOX和FHIT基因的机制；探讨zeb在白血病治疗中的意义。方法：K562与Jurkat按Zeb的不同干预浓度各分为三个组,分别为control组、250μM组(Zeb终浓度为250μM)、500μM组(Zeb终浓度为500μM)。巢式PCR (nested PCR)方法检测细胞Zeb干预48小时后WWOX和FHITmRNA的表达；Western-Blot方法检测细胞Zeb干预48小时后WWOX和FHIT蛋白表达。结果：1.在k562中,control组未检测到有WWOXmRNA表达,而250μM组和500μM组能检测到WWOXmRNA的表达,但250μM组与control组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而500μM)组表达高于control与250μM组,差异有统计学意义(P<0.01)。2.在Jurkat中,control组和250μM组未检测到有WWOXmRNA表达,而500μM组能检测到WWOXmRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。3.K562与Jurkat在Zeb干预48h后,250μM组、500μM组与control组相比,WWOX与FHIT蛋白表达明显升高,差异有统计学上意义(P<0.01),500μM组与250μM组相比,WWOX与FHIT蛋白表达明显升高,差异有统计学上意义(P<0.01)。结论：Zeb能够上调WWOXmRNA、FHITmRNA与WWOX、FHIT蛋白的表达,并有一定的浓度依赖性。第三章Zebularine对K562、Jurkat细胞增殖及凋亡的影响目的：研究Zeb对K562、Jurkat增殖及凋亡的影响；探讨Zeb在白血病中的的抑癌机制；探讨其在白血病治疗中的价值。方法：K562与Jurkat按Zeb的不同干预浓度各分为三个组,分别为control组、250μM组(Zeb终浓度为250μM)、500μM组(Zeb终浓度为500μM)。MTT试剂盒检测12h、24h、36h、48h和72h后两种细胞株的OD570值；倒置显微镜观察细胞Zeb干预48h后的细胞形态；用Annexin V/FITC试剂盒与细胞周期检测试剂盒检测细胞Zeb干预48h后的细胞凋亡。结果：1.k562与Jurkat在zeb干预48h后,随着Zeb处理浓度的增加,细胞OD570值明显降低。2.Zeb干预48h后倒置显微镜观察,K562与Jurkat中,control组生长良好,成团分布,250μM组细胞成团分布细胞减少,呈分散趋向,500μM细胞散在分布,未见成团分布的细胞。3.K562与Jurkat在Zeb干预48h后,250μM组、500μM组与control组相比,早期凋亡细胞比例与细胞凋亡峰(APO峰)值明显增大,差异有统计学意义(P<0.01),500μM组与250μM组相比,早期凋亡细胞比例与细胞凋亡峰(APO峰)值明显增大,差异有统计学意义(P<0.01)。结论：Zeb可抑制K562与Jurkat的增殖,促进其凋亡,并有一定的浓度依赖性。