深裂竹根七化学成分与生物活性研究

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深裂竹根七[Disporopsis pernyi (Hua) Diels]为百合科竹根七属植物,主要分布于南亚海拔500-2500m地区。深裂竹根七长期以来作为一种民间中药,用于治‘疗虚汗、慢性咳嗽、妇女产后虚弱和月经不调。本文对深裂竹根七的化学成分、提取工艺、含量测定方法、体外抗菌和抗氧化活性进行了初步研究。采用硅胶柱色谱、Sephadex-LH20柱色谱、制备薄层色谱等分离手段从深裂竹根七根70%乙醇提取物中分离,并通过理化性质、IR、MS、NMR等波谱手段,对以下7个化合物进行了结构确证:硬脂酸、棕榈酸、芦丁、木犀草素、白桦脂醇、葡萄糖和水杨酸。其中硬脂酸、棕榈酸和白桦脂醇为首次从深裂竹根七中分离得到。对深裂竹根七多酚成分进行了高效液相色谱串联飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)定性研究:采用Diamonsil Ci8柱,乙腈-0.1%甲酸水溶液(pH2.4)进行梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,采用负离子模式检测。利用对照品、文献对照等方法确证了深裂竹根七6种酚类成分。建立气相色谱串联质谱法(GC-MS)对深裂竹根七挥发性成分进行研究。采用岛津QP5050A气质联用仪,HP-5石英毛细管柱(30m×0.25mm;0.25μm),首次鉴定了深裂竹根七12种挥发性成分。建立空气-乙炔火焰原子吸收分光光度法(FAAS)测定深裂竹根七中的10种元素含量。样品采用硝酸-高氯酸(4:1,v/v),在电热板上程序升温消解后测定。结果表明,药材中Na、Mg、K、Cu、Zn和Ca元素广泛地存在于深裂竹根七药材中,而As、Cr、Mo和Pb元素含量均低于限量。该方法简单、快速,可以作为深裂竹根七中Na、Mg、K、Cu、Zn、Ca、As、Cr、Mo和Pb的元素测定方法。使用UPLC法,测定了深裂竹根七中芦丁、木犀草素、槲皮素和白桦脂酸的含量。采用纸片法和试管逐级稀释法,对深裂竹根七中的挥发油、总皂苷、总多酚和总多糖进行了抗菌活性的考察。以卡那霉素和氟康唑为阳性对照,通过对抑菌圈大小的测定,最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测定,系统地评价了深裂竹根七中四种提取物抗菌活性。在4种微生物实验中,结果总多酚显较强的抗菌活性,其他提取物未显示明显的抗菌活性。采用两种经典的抗氧化活性实验方法(DPPH法和FRAP法)进行深裂竹根七4种提取物的抗氧化活性评价。以2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)为阳性对照,结果深裂竹根七中挥发油、总皂苷、总多酚和总多糖都具有一定的抗氧化活性,其抗氧化活性强弱顺序为:挥发油<多糖<皂苷<多酚<BHT。比较了深裂竹根七及其混淆品(玉竹、竹节参、吉祥草和开口箭)在挥发油、抗菌和抗氧化活性方面的异同点。结果表明虽然这五种药材在挥发油成分上有一定的相似之处,但仍存在一定差别。在五种中药甲醇提取物中,开口箭的甲醇提取物显示抗菌活性,而其他四种中药甲醇提取物未显示抗菌活性。用DPPH法和FRAP法评价五种中药甲醇提取物的抗氧化活性,结果这五种中药甲醇提取物都具有一定的抗氧化活性,其抗氧化活性强弱顺序为:深裂竹根七<玉竹<竹节参<吉祥草<开口箭。本研究采用HPLC-Q-TOF-MS、GC-MS、UV和FAAS等多种分析方法和手段,对深裂竹根七中的化学成分进行了定性和定量研究,考察了深裂竹根七的抗氧化和抗菌活性,对深裂竹根七药材的药效物质基础研究、质量控制和药理作用进行了初步地探索和研究。
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