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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的一种猪繁殖障碍和呼吸系统的高度接触性传染病。我国于1996年首次报道此病并分离出病毒，随后该病在我国广泛传播。用于防控PRRSV的传统疫苗不能区分野毒，灭活苗保护率低下，而弱毒苗存在可能毒力返强和毒株间交叉保护性差等问题。因此开发PRRSV标记疫苗和利用PRRSV基因组作为病毒载体的重组活载体疫苗研究成为了当今PRRS疫苗的研究热点方向之一。 本研究采用PCR的方法在PRRSV毒株vJX25HB全长cDNA克隆载体pAJX25HB的基础上，在其ORF7和3UTR之间插入BstBⅠ、SbfⅠ酶切位点和转录调控序列TRS，构建获得了pAJX25HB-73BS-TRS表达载体。之后将外源基因EGFP(green fluorescent protein)、PRRSV-ORF4、EAV(equine arteritis virus,EAV)-ORF4、EAV-ORF5a插入该载体BstBⅠ酶切位点和SbfⅠ酶切位点之间，获得了以下重组质粒:pAJX25HB-73BS-TRS-EGFP、pAJX25HB-73BS-TRS-PRRSV-ORF4、pAJX25HB-73BS-TRS-EAV-ORF4、pAJX25HB-73BS-TRS-EAV-ORF5a。将所有的重组质粒分别转染BHK-21细胞获得包装好的病毒粒子，再转接到MARC-145细胞上进行病毒拯救。结果表明，重组的病毒能够在MARC-145细胞中产生典型的CPE(cytopathic effect)。RT-PCR和IFA分析也能检测到病毒的基因组和PRRSV特异的N蛋白的表达。重组病毒传至第3代，RT-PCR扩增、酶切和测序结果显示重组的PRRS病毒都含有特征性分子标记（人工PCR突变插入的限制性内切酶SbfⅠ酶切位点）和插入的外源基因序列;多步生长曲线实验结果表明，所有拯救的重组病毒在MARC-145细胞上的增殖特性与亲本病毒相似，病毒的滴度在第36h时达到最高值，并且前48h的病毒增殖速度明显高于亲本病毒vJX25HB，rJX25HB-73BS-TRS-PRRSV-ORF4在60h之后其病毒滴度始终最低，rJX25HB-73BS-TRS-EGFP的初始病毒滴度最低，可能是与其插入的外源碱基数量最大有关。另外，作为同为插入EAV的外源基因毒株rJX25HB-73BS-TRS-EAV-ORF4和rJX25HB-73BS-TRS-EAV-ORF5a，除起始时滴度不一样以外，其余时间点病毒滴度几乎保持一致。 本实验为PRRS病毒在其ORF7和3UTR之间插入外源基因进行了前期的基础性研究。因此，此研究为以PRRSV为载体的重组疫苗的研究奠定了重要基础。