亚麻籽粕中木酚素的提取纯化及抗氧化活性研究

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亚麻(Linum usitatissimum L.)为亚麻科(Linaceae)亚麻属(Linum L.)一年生草本植物,其成熟的种子亚麻籽含有大量的酚类物质木酚素。现代研究发现,亚麻木酚素具有抗氧化、抗肿瘤、抑制DNA和RNA合成、抗病毒、真菌等生物活性。由于认知的落后亚麻籽常用于榨取亚麻油,榨油后的副产物亚麻籽粕一般用作饲料添加剂或者有机肥,造成了资源的极大浪费。因此,充分开发利用亚麻籽粕具有一定的实用价值和经济价值。本研究以亚麻籽粕为材料,对其有效成分亚麻木酚素(SDG)的高效液相色谱法(HPLC)检测、提取工艺、纯化工艺进行优化并通过体外抗氧化试验系统评价其抗氧化能力,旨在提高其得率和纯度,为亚麻籽粕的进一步开发利用提供理论和技术支持。主要结果如下:1.以亚麻籽粕为原料,利用乙醇回流法和超声波辅助双水相法提取亚麻木酚素。乙醇回流法最优工艺条件:68%乙醇,提取温度68℃,液料比24 mL/g,提取时间3.0h,SDG得率20.31±0.07 mg/g,纯度18.9%。超声波辅助双水相法最优工艺条件:9.0wt%NaOH,30.0 wt%异丙醇,提取时间39 min,提取温度40℃,液料比52 mL/g,SDG得率19.04±0.08 mg/g,纯度21.5%。2.大孔树脂法纯化亚麻木酚素醇提物(SDG-EA-C)和亚麻木酚素双水相提取物(SDG-ATPS-C)。SDG-EA-C的纯化:D101型大孔树脂,上样体积、上样浓度和上样流速分别为110 mL、3.64 mg/mL和1.0 mL/min,超纯水清洗柱体,洗脱溶剂、洗脱体积和洗脱流速分别为25%乙醇、125 mL和1.0 mL/min,SDG-EA-C纯化物(SDG-EA-P)的回收率81.67%,纯度由18.9%提高至69.7%,提高了50.8%。SDG-ATPS-C的纯化:AB-8型大孔树脂,上样体积、上样浓度和上样流速分别为140 mL、3.18 mg/mL和1.0 mL/min,超纯水清洗柱体,洗脱溶剂、洗脱体积和洗脱流速分别为25%乙醇、90 mL和1.0 mL/min,SDG-ATPS-C纯化物(SDG-ATPS-P)的回收率78.4%,纯度由21.5%提高至73.9%,提高了52.4%。3.半制备HPLC纯化SDG-EA-P的工艺条件:色谱柱Megres C18(30 mm×250 mm,10μm),流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水(B),检测波长280 nm、柱温30℃、进样量2.0 mL(84 mg),流速35 mL/min,洗脱程序:05 min,15%20%A;510 min,20%25%A;1016 min,25%A,可得纯度98%的SDG纯化物,回收率93.2%。4.体外抗氧化活性结果表明:亚麻木酚素各种粗提物及纯化物均具有清除DPPH·,ABTS·,·OH的能力,其中清除DPPH·和ABTS·的能力较强,对·OH清除活性相对较弱。亚麻木酚素在0.060.40μg/μL内对H2O2诱导的质粒DNA氧化损伤存在一定的保护作用,但其在0.060.12μg/μL内对光解条件下H2O2诱导的质粒DNA氧化损伤无保护作用。
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