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前言 周围神经损伤造成神经缺损是临床常见的外伤,自体神经移植已成为其主要的治疗方法,但是由于神经再生不全而影响功能恢复,特别是供移植的自体神经来源有限,供区局部会引起神经痛、麻木、瘢痕等并发症,由此国内、外学者曾进行了大量异体神经移植的实验研究,虽不断有新的前进,但是免疫排斥反应和结缔组织增生快于神经增生,可能是阻碍其进展的一个重要的问题。本实验试图用既能增强神经再生能力又能延缓免疫反应出现时间和抑制结缔组织增生的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)复合降解膜,进行具有综合性作用的实验研究,以便提高神经再生的效果。 实验材料 1.实验动物:从中国医科大学动物饲养中心选购的雌、雄兼有的体重2500-3000g健康的大耳白兔30只。 2.主要试剂:bFGF复合降解膜:bFGF购于珠海生物制品有限公司,由沈阳药科大学协制。 3.主要仪器: (1)肌电图仪(丹麦产) (2)图像分析仪(国产) (3)电镜(日本产) (4)光镜(日本产) 实验方法 1.将30只兔左、右肢正中神经60条,分别切除2.5cm,随机分 4组/与 B组同体左、右各 15条神经,均用经受体动物血浆浸泡冷冻处理的异体神经移植,只是A组的移植处置人bFGF复合降解膜人组不置人膜人与D组同样各15条神经,只经冷冻处理神经缝接人组缝接神经处置人 bFGF复合湖膜p组不以膜。术后不同时间,进行光镜H.E*呐、够鞘染色切片、血一神经屏障切片及透射电镜切片的制作,图像分析仪测定,神经外周粘连定量测定和电生理指标等观察。 2.统计学方法:应用SY.ra--------CAS.0软件行t检验,方差分析。 实验结果 二.肉眼观察:A组和C组的神经移植段表面多较不眼的B组和D组光滑,与外周组织相连的纤维明显较B组和D组的少J组和D组神经远、近端缝合处的梭形膨大明显较A组和C组的大,并较A组与C组与外周组织粘连的重/组神经移植段与外周组织相连较其他各组的少而轻,神经远、近端缝合处膨服各组的明显小。相反对组的较各组与外周组织相连的多而重,远、近端缝合处的校形膨大多大于各组。 2.镜下观察:在术后180天各组俄酸髓鞘染色切片上,可见A组与C组神经移植段和神经远段的有髓神经纤维在数量上和直径上均明显较B组和D组的多而粗,A组神领段的神经外股有规经纤维规鞘明显较各组的多人与C神经移植段神经纤维间的e组织明显少于 B组和 D组,特别是在 Malloty染色标本上更为明显人组神经远、近微合段的结测织增生明显少于其他各组,而D组的明显较靴各组的增生为重。 在透射电镜切片上,可见各组神经近段的有脚经纤维较粗,鹏较厚,龌清湖染色较深,而神经远段的有湖经纤维比较 ·2·细的多,髓鞘满的多,板层不清楚着色浅的多,比较各组神经远段的有髓神经纤维上组较B组的和C组较D组的髓鞘厚,板层较清楚且染色较深。 3.血一神经屏障功能恢复:通过术后56天so天和指 天3只兔的左u组X右门组)肢正中神经移植段的HRP反应呈色观察得知:在术后人组左与右肢正中神经神经纤维间以及神经束和外膜内均呈棕黄色HRP阳性反应,随术后时间(术后90天和180天)后移,左与右肢神经柬膜与外膜依然呈 HRP阳性反应,但左肢K组)神经内膜和神经纤维间的HRP阳性呈色明显较B组(右肢)的淡,待术后 180天 A组几乎均呈 Hgy阴性反应/ $神经纤维间尚显有棕黄色HRP阳性反应。 4.LUZe-F图像分析仪测定:测定得知人组术后90天*天神经近段(正常部位)与神经远段(再生部位)的有髓神经纤维比例拥u为2.5:1.0、1.1:1.0,B组术后90天上 天神经近、远段有髓神经纤维比例为7.2:1.0乃.2:1.0。术后180天各组再生有髓神经纤维的效果显示:*)包裹m*再复合糊膜异体神经移植组的再生有髓神经纤维k与C组)数量优于不包膜的B与D组h<0,01人p则组和 A组的再生有髓神经纤维数量优于只经冷存的D组和C组。 5.神经外周组织粘连定量测定:术后56天神经近端缝合段与外周组织粘连定量测定显示人组(实验侧)神经移植处包裹bFGF复合降解膜的近端缝合段与外周结缔组织粘连程度明显较B组(对照侧)不包膜的轻,其结果有显著差异h<0.01人 6.电生理指标:术后 180天屈腕肌肌电的测定显示:门川组明显较A组的潜伏期延长…<0.见门。p则组波幅较A组的低(P<0.05)。 ·3· 讨 论 B前认为用冷冻前处理神经移植物,可降低其抗原性。而能获得神经再生成功,但是迄今依然由于免疫反应,结缔组织增生干扰,致使神经再生受阻,而未能取得一个突破性进展用于临床。本实部为神经再生慢于免疫排斥反应和结缔组织增生干扰,可能是其中一个重要原因,为此试图在经动物受体血浆浸泡和冷冻前处理的异体神经移植,缝接神经缺损处,置腹有?