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研究背景肺癌是我国发病率较高的恶性肿瘤,在恶性肿瘤死亡的前列,其中80%-85%为非小细胞肺癌,因此,探讨肺癌的发生、发展、浸润、转移的机制成为目前研究的热点。目前NSCLC的主要治疗包括手术、化疗、放疗和分子靶向等综合性治疗。大多数NSCLC患者就诊时已属晚期,失去了手术机会,化疗成为最主要的抗肿瘤治疗。白藜芦醇(3,4’,5-三羟基-反-均二苯代乙烯)是一种由植物合成的应对抗外来病原的多酚类化合物,已在多种植物中被发现。葡萄皮和红葡萄酒中白藜芦醇的含量较高,而白葡萄酒中的含量极低。因此,研究者认为白藜芦醇是“法国悖论”现象(尽管法国人同其他发达国家的居民一样,摄取了大量的高脂肪、高蛋白、高热量的食物,但他们的心血管病发病率却比其他发达国家低得多)发生的一种关键物质。研究显示,白藜芦醇具有调节脂质代谢、抑制血小板聚集、清除自由基、抗炎、抗肿瘤等多种生物学活性和药理作用。虽然白藜芦醇抗肿瘤的作用近年来已经成为一个研究热点,但是目前国内外尚无白藜芦醇在体内、体外环境下抗肿瘤活性的系统性研究报道,并且对于其抗肿瘤的机制也存在着多种观点。白藜芦醇衍生物和类似物(其中包括羟基类似物及甲基化和酯类衍生物等)与白藜芦醇一样具有多种生理药理活性,其中有些化合物的活性、选择性及稳定性均要强于白藜芦醇,故备受关注,成为近些年的研究热点。为了全面了解白藜芦醇的抗肿瘤活性,同时深入揭示其抗肿瘤作用的机制,进行了本项实验。在一些恶性肿瘤不仅发现NF-κB／Re 1基因结构的改变,而且发现其表达及活化水平的异常。大量的研究表明,NF-κB作为转录因子Rel家族的重要成员,在调节免疫反应、胚胎及细胞生长、细胞凋亡、细胞周期进展、炎症和肿瘤的形成中起着重要的作用。为了确定三甲氧基二苯乙烯是否有抗非小细胞肺癌效应,本研究用三甲氧基二苯乙烯作用于A549细胞株,观察三甲氧基二苯乙烯对A549细胞是否具有增殖抑制、凋亡诱导和分化诱导作用；并对其分子机制进行探讨。第一章三甲氧基二苯乙烯的结构鉴定目的对本实验药物TMS进行结构鉴定。方法用紫外吸收光谱检测、红外吸收光谱检测、1H-NMR谱检测、13C-NMR图谱检测、质谱检测等方法对TMS进行结构鉴定。结果TMS的紫外吸收图谱为λmax(MeOH):318nm,306.2nm,217.8nm,红外光谱解析为IRvKBrmax(cm-1):2999,2935,2836,1591,1511,1456,1H-NMR谱解析显示结构含有3个甲氧基,13C-NMR图谱解析为17个碳信号,并且其结构中含有对称的结构片段。质谱图谱解析为ESI-MSm/z：27 1[M+H]’,256[M+H-CH3],241[256-CH3]+,表明分子量为270,推测分子式为C17H18O3,结构中含有甲基。样品元素分析得分子结构式可用C17H18O3表示,结构式为因此可确定化合物为反-3,4’,5-三甲氧基二苯乙烯。结论TMS的分子结构式可用C17H18O3,表示结构式为是反-3,4’,5-三甲氧基二苯乙烯。第二章三甲氧基二苯乙烯对非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制效应目的观察三甲氧基二苯乙烯对A549细胞细胞增殖的影响。方法用MTT试验、集落形成抑制试验A549细胞增殖能力,观察不同浓度的三甲氧基二苯乙烯对A549细胞增殖的抑制率、集落形成的影响。结果(1)三甲氧基二苯乙烯以浓度依赖性方式有效地抑制A549细胞增殖,三甲氧基二苯乙烯抑制A549细胞活力的工C50为8.6μmol/L；(2)三甲氧基二苯乙烯能显著抑制A549细胞集落形成,并呈量效关系；结论三甲氧基二苯乙烯能够有效地抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度和时间依赖性。第三部分三甲氧基二苯乙烯对A549细胞的凋亡诱导效应目的确定三甲氧基二苯乙烯能否诱导A549细胞凋亡。方法用不同浓度的三甲氧基二苯乙烯作用于A549,采用Hoches t33258染色法检测凋亡细胞的百分率；用Western印迹检测三甲氧基二苯乙烯干预后的A549细胞Caspas e一3蛋白质表达。结果(1) Hochest33258染色法证明三甲氧基二苯乙烯能以浓度依赖性方式诱导A549细胞凋亡；(2)三甲氧基二苯乙烯诱导A549细胞凋亡伴有Caspas e一3蛋白表达上调和裂解激活。结论三甲氧基二苯乙烯能以浓度依赖性方式诱导A549细胞凋亡；其诱导A549细胞凋亡的分子机制与Caspase一3蛋白表达上调和裂解激活有关。第四章三甲氧基二苯乙烯对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制目的观察三甲氧基二苯乙烯作用下A549细胞增殖抑制和凋亡诱导过程中NF-κB、STAT3、STAT5b、及JAK2等增殖和凋亡相关蛋白表达水平的变化及NF-κB细胞内分布,部分揭示三甲氧基二苯乙烯抗A549细胞作用的分子机制。方法(1)用Western blot分析三甲氧基二苯乙烯作用下A549细胞NF-K B、I K B、STAT3、STAT5b、JAK2蛋白质表达水平,(2)用间接免疫荧光技术观察NF-κB在三甲氧基二苯乙烯干预的A549细胞中的定位及变化。结果三甲氧基二苯乙烯能以浓度依赖性方式抑制A549细胞NF-κB、STAT3、STAT5b、蛋白质的表达水平,可上调IKB蛋白质表达,但对JAK2蛋白无明显影响；NF-κB主要分布于细胞胞浆中。结论三甲氧基二苯乙烯的抗A549细胞作用与其抑制STATs和NF-KB信号转导途径有关。