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背景与目的乳腺癌是我国发病率很高的恶性肿瘤,严重的威胁着广大女性的健康。化疗是目前治疗乳腺癌的重要的治疗手段,由于乳腺癌伴随在化疗过程中所产生的多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象,常常导致化疗的失败,严重影响乳腺癌患者的生存期和生存质量,是目前乳腺癌化疗的主要障碍,也是正在困扰肿瘤临床治疗的关键性难题。以往对乳腺癌耐药机理的研究多集中在多药耐药相关的基因及P-gP等方面,近年来发现神经酰胺糖基化水平的提高可能是肿瘤细胞形成MDR的一个新的机制。葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase)可以催化神经酰胺糖基化生成了葡萄糖神经酰胺,失去了其神经酰胺的细胞凋亡作用,肿瘤细胞凋亡减少,从而引起肿瘤细胞的MDR。本实验采用细胞活性(Cell Counting kit-8, CCK-8)法检测阿霉素(adriamycin, ADR),顺铂(DDP),5-氟尿嘧啶(5-FU)对人乳腺癌敏感细胞株MCF-7和20 gmo1/L的GCS抑制剂(PDMP)预处理MCF-7/ADR24h前后的耐药细胞株MCF-7/ADR的半数抑制浓度(IC50),然后用RT-PCR和Western blot法检测MCF-7及PDMP处理前后的MCF-7/ADR细胞中GCS、P-gp、Bcl-2的mRNA和蛋白表达,从：nRNA和蛋白水平研究GCS、P-gp、Bcl-2与乳腺癌发生、发展以及多药耐药产生的关系,为临床乳腺癌耐药的治疗提供一定的理论方向,从而节约乳腺癌患者的治疗成本并为医疗事业的进一步发展打下基础并提供可靠依据。方法1.常规培养MCF-7/ADR和MCF-7两种细胞,其中MCF-7/ADR细胞培养液中加入阿霉素(adriamycin, ADR) 200ug/L,以维持其相应的耐药表型。于检测前撤除ADR培养2周。2.采用细胞活性(Cell Counting kit-8, CCK-8)法检测阿霉素(adriamycin,ADR),顺铂(DDP),氟尿嘧啶(5-FU)对人乳腺癌敏感株MCF-7和20μmol/L的GCS抑制剂(PDMP)预处理MCF-7/ADR 24 h前后的耐药细胞株MCF-7/ADR的敏感性(IC50)。3. RT-PCR和westemblot法在mRNA水平和蛋白水平上检测MCF-7及PDMP预处理MCF-7/ADR前后GCS、P-gp、Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果1. CCK8结果：MCF-7/ADR细胞对ADR、DDP、5-FU的IC50均高于MCF-7(p<0.05)。表明MCF-7/ADR对ADR、DDP、5-FU等多种化疗药物有耐药性。PDMP作用后ADR、DDP、5-FU对MCF-7/ADR的IC50下降(p<0.05)。2. RT-PCR和Western blot结果：GCS在MCF-7、MCF-7/ADR、PDMP作用后的MCF-7/ADR细胞中均有表达,GCSmRNA和蛋白的相对表达量在耐药细胞MCF-7/ADR表达水平较高,显著高于亲本细胞MCF-7 (p<0.05), PDMP作用后的MCF-7/ADR细胞GCSmRNA和蛋白的相对表达量降低。P-gp和Bcl-2也具有与GCS类似的结果。结论1.乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/ADR中均有GCS、P-gp、Bcl-2的表达,但不同的细胞表达水平不同。耐药细胞株MCF-7/ADR中GCSmRNA和蛋白的表达水平较高,明显高于其亲本细胞株MCF-7,提示GCS、P-gp、Bcl-2参与了乳腺癌的发生发展过程,并与乳腺癌细胞的多药耐药有关。2. PDMP抑制了GCS的表达,使抑制了GCS后的MCF-7/ADR细胞对化疗药物的敏感性增高,可以有效的逆转了肿瘤细胞的多药耐药现象。