论文部分内容阅读
目的：观察杜仲醇提取物诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Wnt信号途径通路相关基因表达变化。方法：将杜仲制备成盐杜仲,取制备好的50克盐杜仲粉末,经过60%乙醇提取及柱层析等方法,得到杜仲醇提取物。将2月龄SD大鼠颈椎脱位法处死以后置入体积分数70%乙醇溶液消毒5-10分钟,并在无菌条件下将大鼠股骨和胫骨骨中的骨髓间充质干细胞进行分离、培养和传代,使用第3代SD大鼠BMSCs,将其接种到6孔培养板中,每孔1×103个细胞,设立诱导组和阴性对照组,正常培养基(含体积分数为7.5%胎牛血清的DMEM/F12)培养24h,24h后诱导组换成诱导培养基(含体积分数为7.5%胎牛血清的DMEM/F12(1:1)加1/1000浓度的杜仲醇提取物),阴性对照组继续使用正常培养基培养。采用RT-qPCR法对诱导4h,8h,24h和72h时Wnt信号通路中相关基因(Fzd和LRP受体系列、β-catenin、核内Wnt调控靶基因系列及Wnt抑制因子等)的表达进行测定。结果：诱导组与阴性对照组比较,诱导组4h后,β-catenin表达升高18.65倍,8h后恢复正常,24h后明显降低,72h表达升高7.61倍；诱导组8h后Fzd3表达升高,并持续到第72h, TCF3表达明显降低并持续到第72h。结论：结果提示杜仲醇提取物诱导骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Wnt信号途径可能参与了其过程。意义：通过检索有关文献,杜仲促BMSCs成骨分化的Wnt信号转导途径还未经证实。经过实验研究,杜仲促骨髓间充质于细胞成骨分化过程中Wnt信号途径相关基因表达明显变化,为诱导BMSCs成骨分化的分子机制和信号途径积累中药实验的数据。