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鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)和鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)均在我国鸡群中普遍流行,且近年来关于IBV与NDV混合感染的报道越来越多,但目前关于这两种病原的共感染的致病性还未见相关报道。鉴于NDV对鸡具有高致病性,故本研究选择在新城疫免疫鸡群中建立鸡传染性支气管炎强毒与新城疫强毒混合感染模型,并通过临床观察、组织病理学分析、血清学试验、Real-time PCR等方法对各组鸡的临床症状、死亡情况、组织病理变化、抗体水平、病毒复制滴度和攻毒后天然免疫相关因子表达水平的变化进行了系统研究。研究内容如下:首先本研究分离到一株QX型IBV强毒将其命名为CK/CH/HD/171018,随后对其进行全基因组序列测定(登录号为MH020185),结果表明其1a基因发生重组。然后本研究将152羽SPF鸡随机分成8组,其中A～F组于50日龄免疫La Sota灭活苗,G、H组作为未免疫对照,随后于64日龄以滴鼻点眼的途径对A～F组分别接种PBS、ZJ1、QX、QX+ZJ1(+24h)、ZJ1+QX(+24h)、QX+ZJ1,G、H组接种ZJ1和QX。连续观察20天,记录死亡情况。期间,于攻毒后2d、3d、5d、7d,分别采集每组SPF鸡的气管、肺脏、脾脏、肾脏、盲肠及法氏囊,进行组织病理学观察和用于脏器含毒量以及细胞因子的表达水平检测。结果表明G组(ZJ1阳性对照)于攻毒后第5天全部死亡,H组(QX阳性对照)及免疫后单独接种PBS、ZJ1和QX组(A～C组)未死亡,而混合感染QX+ZJ1(+24h)、ZJ1+QX(+24h)和QX+ZJ1组死亡率分别为30%、20%和30%,明显高于单独感染QX或ZJ1组。与单独感染QX或ZJ1组相比,混合感染组的临床症状及病理损伤情况均更加严重。此结果证实,新城疫免疫鸡群中IBV强毒与NDV强毒之间存在明显的协同致病增强作用。本研究随后比较了NDV和IBV的抗体水平,结果表明,攻毒后第二天各组NDV抗体水平均有明显升高,但是IBV的抗体直到攻毒后第7天才有显著上升。本研究分别建立了NDV和IBV的绝对定量Real-time PCR的方法,并检测了各组鸡泄殖腔排毒情况,对其气管、肺脏、脾脏、肾脏、盲肠和法氏囊进行了病毒滴度测定,并同时用相对定量Real-time PCR法检测了脏器中的IFNα、IFNβ、1L-1β、1L-6、MX和PKR表达水平。结果表明,混合感染能够导致泄殖腔两种病毒的排毒率和排毒量均显著上升,排毒周期明显延长,且两种病毒在各脏器中的含毒量均显著上升。天然免疫相关因子的检测结果显示,在单独感染QX或ZJ1早期,各种细胞因子均有较高水平的表达;而在混合感染早期,各组织中的抗病毒因子表达水平较低,在后期则会出现强烈的细胞因子免疫应答。基于以上结果,本研究认为这一现象可能与QX和ZJ1的协同致病相关。综上所述,本研究成功建立了IBV和NDV的混合感染模型,系统地检测了混合感染后两种病毒的动态变化以及宿主的抗病毒反应,为证实IBV和NDV混合感染后致病力增强提供了有力论据,同时也为我国IBV和NDV的综合防治提供了参考信息。