沙门氏菌、大肠杆菌等微生物严重困扰着家禽养殖业和人类的生命健康。近几十年抗生素的大量使用,导致动物产品中抗生素残留以及耐药菌群的产生。因此研究具有抗菌功效的抗生素物显得尤为重要。天然抗氧化物葡萄籽原花青素（Grape seed proanthocyanidins extract,GSPE）因其具有较强的抗炎作用,日益受到人们的关注,作为抗生素替代品具有较大的潜力,但鲜见GSPE在家禽卵巢炎症方面的报道。本研究从临床症状、组织形态学、基因表达水平等方面研究鸡白痢沙门氏菌对雏鸡的致病性,探索沙门氏菌内毒素对雏鸡卵巢的影响及其致病机理,并进一步探讨G S P E对沙门氏菌内毒素导致的鸡卵巢颗粒细胞损伤的缓解作用,并从细胞凋亡、抗氧化水平、TLR4/NF-κB信号通路等方面揭示其作用机理。为合理开发抗炎抗菌物质,预防细菌内毒素引起的生殖损伤提供理论依据。1.沙门氏菌对雏鸡卵巢的致病性及其机理的探究本研究以1日龄SPF巴布考克雏鸡为实验对象,将100只雏鸡随机分为五组,通过口 服饲喂 1 mL 浓度为 1.0×109 CFU/mL 的MY0259、MY00664、MMY00682与CVCC0534鸡白痢沙门氏菌,对照组口服相同剂量0.9%生理盐水。从生长性能、全期死亡率、临床评分、形态学等方面评估四株沙门氏菌对雏鸡致病性的作用;通过qRT-PCR检测卵巢中TLR4受体及促炎因子的基因表达水平;通过免疫荧光染色检测卵巢中CD14的阳性率;以及对LPS含量的检测。结果显示:MY0259、MY00664、MY00682与CVCC0534组生长性能均显著低于对照组（P<0.05）;雏鸡感染沙门氏菌后,MY0259组与MY00664组HE染色显示回肠绒毛受损严重,肝脏出现明显的致病灶;卵巢中颗粒细胞异常,卵泡数显著低于对照组（P<0.05）;卵巢中CD14阳性率显著高于对照组（P<0.05）;卵巢中的LPS含量显著高于对照组（P<0.05）;TLR4信号通路基因相对表达水平显著上调（P<0.05）。综上所述,鸡白痢沙门氏菌在感染雏鸡后对雏鸡卵巢造成了损害,在此过程中内毒素起了重要的作用。2.原花青素对沙门氏菌LPS诱导的卵巢颗粒细胞炎性损伤的缓解在小黄卵泡颗粒细胞体外培养体系中,通过检测细胞活力和观察细胞形态研究LPS对颗粒细胞的毒性作用。结果表明,在LPS处理颗粒细胞6h后,LPS（125μg/mL）处理组颗粒细胞伪足受损,细胞固缩,细胞活力达到IC 50。之后用1、10、100μmol/LGSPE和LPS（125μg/mL）单独或共处理 6h,结果显示10μmol/L原花青素与LPS同时处理组的颗粒细胞伪足被保护,细胞形态趋于正常,细胞活力显著升高（P<0.05）。进行EdU与TUNEL试验检测细胞增殖与凋亡,结果显示原花青素与LPS同时处理组可显著缓解LPS诱导的颗粒细胞凋亡（P<0.05）,同时显著增加颗粒细胞增殖（P<0.05）。上述结果表明,原花青素可能通过抗凋亡作用缓解LPS引发的生殖损伤。3.原花青素和内毒素对颗粒细胞作用机理的探究在小黄卵泡颗粒细胞体外培养体系中,用GSPE（10μmol/L）和LPS（125μg/mL）单独或同时处理6 h。通过抗氧化酶活性检测颗粒细胞抗氧化水平变化;通过免疫荧光染色和qRT-PCR等方法检测TLR4/NF-κB信号通路及促炎细胞因子的基因表达水平。结果显示,LPS（125μg/mL）处理组颗粒细胞的H2O2水平显著上升（P<0.05）,GSH、T-SOD显著低于对照组（P<0.05）,而GSPE处理组与对照组无显著性差异（P>0.05）,表明GSPE可以缓解LPS引起的颗粒细胞氧化损伤。LPS处理组中TLR4、NF-B、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的基因相对表达水平显著上调（P<0.05）,而GSPE与LPS共处理组均显著下调（P<0.05）。LPS处理组颗粒细胞中CD14阳性率显著升高（P<0.05）,而在GSPE与LPS共处理组显著降低（P<0.05）。综上所述,10μmol/L GSPE可能通过抗氧化作用和抗凋亡作用缓解LPS诱导的细胞毒性。其中,TLR4信号通路在原花青素缓解LPS诱导的颗粒细胞损伤过程中发挥重要作用。这为合理开发抗炎抗菌物质预防细菌内毒素引起的生殖损伤提供理论依据。