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目的：非小细胞肺癌患者的EGFR基因突变状态是临床使用EGFR TKIs的重要疗效预测分子标志物。因此,临床治疗前对肺癌患者进行基因突变检测,可指导患者个体化用药,减轻患者经济负担,同时也可使EGFR TKIs的疗效最大化。在治疗过程中如能对患者的EGFR突变状态实时监测,有利于早期疗效及预后判断。临床上稳定、高效的分子检测平台的建立是实现上述目标的关键所在。本实验的主要目的：采用castPCR方法检测肿瘤组织EGFR基因突变,研究初治肺腺癌患者EGFR基因突变状况,初步系统评价castPCR法检测]EGFR突变在NSCLC患者中的应用价值并探讨其与患者临床生物学行为的相关性。由于部分晚期肿瘤患者难以取得合适的肿瘤组织标本进行分子检测,以及在EGFR TKIs治疗中获得性耐药的存在,外周血清/血浆中的游离核酸以其蕴含的丰富分子生物学信息吸引了广泛关注。本研究中采用已知的突变细胞系DNA模拟外周血检测的情况,初步分析论证了castPCR法检测EGFR相关突变位点的敏感性,为后续基于肺癌患者外周血游离核酸中EGFR驱动突变的检测奠定了基础。方法：1、收集2010年11月至2014年12月南京大学附属鼓楼医院103例初治的肺腺癌患者的临床病理资料、肿瘤组织及配对的治疗前外周血标本。使用castPCR法检测患者肿瘤组织标本EGFR基因突变(外显子19 de12235-2249和de12236-2250；外显子20 T790M；外显子21 L858R)。探讨EGFR基因突变状态与103例NSCLC患者临床生物学行为之间的相关性。2、将EGFR基因突变细胞DNA按照一定比例稀释到EGFR野生型DNA中,用castPCR法检测突变,获得检测EGFR基因突变的敏感性。为后续检测血浆游离核酸中EGFR驱动突变奠定基础。结果：103例肺腺癌患者肿瘤组织中共有54例检出了存在至少一个位点的EGFR基因突变(突变率52.43%),其中敏感突变(外显子19和／或外显子21)为45人(43.69%),外显子20突变为11人(10.68%)。同时我们的研究发现部分患者存在敏感突变与敏感突变、敏感突变与耐药突变共存的现象,其中外显子19和20共突变2人,外显子19和21共突变4人,外显子20和21共突变1人。体外细胞实验表明castPCR法检测EGFR基因外显子19和外显子21突变的敏感性为0.1%,外显子20突变的敏感性为1%。结论：本实验我们采用灵敏性高、特异性好的方法,通过对103例肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变状态的检测,初步论证了该方法在肺癌EGFR驱动突变检测方面的临床可行性。同时,通过对模拟外周血游离核酸中微量突变存在的检测,证实了该方法后续进一步检测患者配对血浆游离核酸中EGFR突变的可行性。