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第一部分:肺结核患儿和正常儿童外周血单个核细胞的miR-125b及其靶基因RAF1的表达检测目的:分别检测肺结核患儿和正常儿童外周血单个核细胞中mi R-125b水平,及靶基因RAF1的m RNA和蛋白水平。方法:分别分离出已收集血液标本中外周血单个核细胞。利用荧光定量PCR检测mi R-125b的表达及其RAF1的m RNA水平;利用蛋白免疫印记技术检测RAF1的蛋白水平。结果:1.相对于正常儿童,肺结核患儿外周血单个核细胞中mi R-125b的表达下调;2.相对于正常儿童,肺结核患儿外周血单个核细胞中RAF1的m RNA和蛋白水平都升高。结论:肺结核患儿外周血单个核细胞中mi R-125b表达下调,其靶基因RAF1表达升高;mi R-125b靶向调控RAF1可能参与儿童结核免疫反应机制。第二部分:mi R-125b与体外培养巨噬细胞生物学行为关系的研究目的:在THP-1巨噬细胞中,检测mi R-125b是否调控RAF1的表达;并观察mi R-125b对THP-1巨噬细胞中细胞凋亡和细胞活力的调节。方法:THP-1巨噬细胞分为四组,分别为mi R-mimic组、NC-mimic组、mi R-inhibitor组及NC-inhibitor组,利用Lipofectamine TM RNAi MIX分别转染mi R-125b模拟物(mi R-125b mimic)、阴性对照模拟物(NC-mimic)、mi R-125b抑制物(mi R-125b inhibitor)以及阴性对照抑制物(NC-inhibitor),转染后,孵育箱中共培养48h;利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测THP-1巨噬细胞中RAF1表达,利用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测THP-1巨噬细胞的细胞凋亡,CCK-8法检测巨噬细胞的细胞活力。结果:1,在THP-1巨噬细胞中,mi R-mimic组,相比较其对照组NC-mimic组,即mi R-125b高表达时,RAF1表达下调;相比较其对照组NC-inhibitor组,mi R-inhibitor组,即mi R-125b表达被抑制时,RAF1表达上调。2,在THP-1巨噬细胞中,相对于NC-mimic组,mi R-mimic组,高表达mi R-125b,促进细胞凋亡,细胞活力降低;相对于NC-inhibitor组,mi R-inhibitor组,mi R-125b表达被抑制时,抑制巨噬细胞凋亡,细胞活力升高。结论:在THP-1巨噬细胞中存在mi R-125b对靶基因RAF1的调控;mi R-125b的表达升高,促进巨噬细胞凋亡,降低细胞活力;mi R-125b的表达被抑制时,抑制细胞凋亡,提高细胞活力。