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DHA作为重要的多不饱和脂肪酸一直以来被当做营养品和保健品应用于哺乳动物饲料、海水鱼养殖甚至人类食品之中,其为动物提供了大量的高不饱和脂肪酸,不仅促进生长、增强免疫,还促进了动物肌纤维的发育,进而影响了肌肉的品质和口感。但对于淡水鱼类来说,传统研究一般认为其可以自主合成DHA等高不饱和脂肪酸,在饲料中无需添加。为了研究DHA是否为团头鲂生长所必需的脂肪酸,明确DHA对淡水鱼生长、肌纤维发育和细胞周期的影响,以期促进淡水鱼的生长、肌肉品质和健康,本试验分为以下三个方面的内容:试验一饲料中不同DHA水平对团头鲂生长、脂肪酸组成和脂肪合成的影响本试验旨在研究饲料中不同DHA水平(0.05、0.13、0.23、0.42、0.81和1.59%日粮)对团头鲂生长、脂肪酸组成以及脂肪合成相关基因表达的影响。将团头鲂(平均体重26.40±0.11 g)随机分为六组,分别饲喂六种饲料,持续8周。结果表明,饲喂0.13% DHA的鱼的FBW和SGR显著高于除0.23% DHA之外的其他组(P<0.05)。根据SGR的回归曲线可知,团头鲂饲料中DHA的适宜需求量为0.11%。0.23%DHA组中油红O染色的肝脏脂滴的面积显著高于其他组(P<0.05),这与全身和肝脏中脂质含量的趋势一致。肝脏和肌肉中DHA的含量随着饲料中DHA水平的增加而显著增加(P<0.05),这表明组织中的脂肪酸组成反映了饲料中的脂肪酸组成。0.13% DHA组和0.23% DHA组中的ACCα和FAS的mRNA表达量显著高于其他组(P<0.05)。总之,团头鲂饲料中DHA的适宜需求量为0.11%。饲喂0.13-0.23% DHA可以促进团头鲂的生长和脂肪合成,提高肝脏和肌肉中DHA和PUFA的含量。试验二DHA对团头鲂肌纤维发育和肌肉品质的影响本试验旨在通过养殖试验和原代肝细胞培养试验来评估DHA对团头鲂肌纤维发育机制的影响。团头鲂(平均体重26.40±0.11 g)被随机饲喂含三种水平DHA饲料:0.05% DHA、0.13% DHA和0.81% DHA,持续8周。结果表明,饲喂0.13%DHA日粮的鱼WGR显著高于饲喂0.05% DHA和0.81% DHA的鱼(P<0.05)。0.81%DHA组的白肌质构(硬度、胶粘性和咀嚼性)、纤维密度、小型肌纤维比例(<20μm)和肌节长度显著高于 0.05% DHA 和 0.81% DHA (P<0.05)。0.81% DHA组的鱼肌肉中Myog和Mrf4的基因表达显著增加(P<0.05),MSTNa和MSTNb的基因表达显著低于0.05% DHA和0.13% DHA组(P<0.05)。这些结果表明,0.81%DHA提高了肌肉品质,并促进了白肌增殖和肌纤维发育。此外,0.13% DHA和0.81% DHA组中肝脏中的AMPKα2和Sirt1的基因表达,AMPK、p-AMPK和AMPK/p-AMPK的蛋白水平显著高于0.05% DHA组(P<0.05)。在体外,将从团头鲂中分离出的原代肝细胞与0、100和400 μM DHA孵育24小时。结果表明:400 μM DHA显著上调AMPKα2和Sirt1的基因表达,并增加AMPK,p-AMPK,AMPK/p-AMPK和Sirt1的蛋白水平(P<0.05)。总之,0.81% DHA通过激活AMPK/Sirtl途径促进白肌增殖和肌纤维发育,提高肌肉品质。试验三高水平的DHA通过诱导细胞周期停滞影响团头鲂生长的研究试验一的研究发现饲喂高水平的DHA会导致团头鲂的生长发育迟缓,为探索其原因,我们设计了养殖试验和原代肝细胞培养试验。团头鲂(平均体重26.40±0.11g)被随机分为三组,饲喂不同水平的DHA:0.05% DHA、0.23% DHA和1.59% DHA,持续8周。结果表明,饲喂1.59% DHA的鱼的末重和增重率显著低于0.23% DHA(P<0.05)。与 0.05% DHA 和 0.23% DHA 组相比,1.59% DHA 组的肝脏中P53的基因和蛋白表达显著增加(P<0.05),下游Cyclin D1和Cyclin E1的表达被显著抑制(P<0.05)。在体外,将从团头鲂中分离出的原代肝细胞与500μM DHA孵育后,与对照组相比,细胞周期停滞和细胞凋亡显著增加(P<0.05),P53的基因和蛋白质水平显著增加(P<0.05),Cyclin D1和Cyclin E1的表达显著下降(P<0.05)。当原代肝细胞与DHA和P53抑制剂(Pifithrin-α)一起孵育时,P53的表达和P53介导的信号传导受到抑制,细胞周期得以恢复,细胞凋亡减少。总之,高水平的DHA通过激活P53/Cycling途径诱导细胞周期停滞。抑制P53活性可能是减少DHA对团头鲂生长的副作用的潜在方法。总之,团头鲂饲料中DHA的适宜需求量为0.11%。0.13%-0.23% DHA可以促进团头鲂的生长,提高肝脏和肌肉中DHA和PUFA的含量;0.81%DHA通过激活AMPK/Sirt1途径促进白肌增生和肌纤维发育,提高肌肉品质;高水平的DHA通过激活P53/Cycling途径诱导细胞周期停滞,抑制团头鲂的生长。