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目的: 本课题以国家自然科学基金资助项目(编号:81072838)为依托进行设计。在中医学“情志学说”理论基础上,结合现代医学“心理应激理论”,基于课题组前期应用去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、肾上腺素(Epinephrine,E)、异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)作用于体外培养的人子宫肌瘤(Uterine leiomyomas,ULM)平滑肌细胞,证实神经递质与ULM细胞增殖、雌激素受体(Estrogen receptor,ER)和孕激素受体(Progesterone receptor,PR)表达有明显相关性的基础上,进一步研究NE及其拮抗剂酚妥拉明对ULM细胞体外生长的影响。探讨肝郁-心理应激通过激活肾上腺素能受体信号转导通路影响ULM细胞体外增殖及ER、PR蛋白表达的机制,揭示肝郁-心理应激在子宫肌瘤发病中的作用,为临床从肝郁-心理应激角度防治ULM提供新的思路和方法,并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。 方法: 以人子宫肌瘤组织(经病理检查证实)为材料,应用胶原酶消化法,体外分离、培养获得ULM细胞,经HE及免疫细胞化学SABC法进行细胞学鉴定。将培养的ULM细胞分为三组:Α.对照组;B. NE组;C. NE+酚妥拉明组。B组添加NE1μmol/L,C组预先加酚妥拉明1μmol/L培养1h后加NE1μmol/L,三组细胞培养12h后收集。应用MTT法检测细胞增殖情况;采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA法)测定各组细胞ER、PR蛋白的表达。 结果: 1.成功培养了人ULM平滑肌细胞,并通过了HE染色及免疫细胞化学鉴定。 2.NE及酚妥拉明对ULM细胞增殖的影响: 与对照组比较,NE组代表ULM细胞增殖情况的OD值明显高于空白组,差异有显著性(P<0.05)。NE+酚妥拉明组与 NE组比较,OD值低于NE组,差异无显著性((P>0.05)。NE+酚妥拉明组与对照组比较,OD值高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。 3.NE及酚妥拉明对ULM细胞ER表达的影响: 与对照组比较,NE组ULM细胞ER蛋白表达明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。NE+酚妥拉明组与NE组比较,ULM细胞ER蛋白表达明显低于NE组,差异有显著性(P<0.05)。NE+酚妥拉明组与对照组比较,ER蛋白表达明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。 4.NE及酚妥拉明对ULM细胞PR表达的影响: 与对照组比较,NE组ULM细胞PR蛋白表达明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。NE+酚妥拉明组与NE组比较,ULM细胞PR蛋白表达明显低于NE组,差异有显著性(P<0.05)。NE+酚妥拉明组与对照组比较,ULM细胞PR蛋白表达高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: 1.NE具有促进ULM细胞增殖的作用。 2.NE具有促进ULM细胞ER、PR蛋白表达的作用,而酚妥拉明抑制ULM细胞ER、PR蛋白的表达。 3.因此本课题组推测:肝郁-心理应激可能通过兴奋交感-肾上腺髓质系统,使神经递质NE的释放增加,通过激活ULM细胞中肾上腺素能受体信号转导途径,促进ULM细胞增殖,并且促进ULM细胞ER、PR的表达,进一步扩大了雌孕激素的效应,促进ULM发生发展。