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黄绿青霉素(Citreoviridin,CIT)主要是由黄绿青霉菌(Penicillum Citroviridin,PCV)在低温高湿度等环境中产生的一种毒性次生代谢物。研究表明黄绿青霉素是呼吸链中氧化磷酸化反应ATP合成酶的非竞争性抑制剂,导致ATP的合成受到抑制,从而能引起心脏性脚气病。同时CIT在动物体内它可引起呕吐、抽搐、休克和抑制中枢神经系统等症状。据报道,在中国的一些主要区域,黄绿青霉素在农作物中的污染水平介于4.9～33.2 μg/kg之间。然而,到目前为止,相关监管机构并未建立CIT在食品中的安全限制范围。而相关的检测方法也只是局限于于高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)、薄层色谱法(Thin-layer chomatography techniques,TLC)、紫外光谱技术(UV spectrum)、红外光谱技术(IR spectrum)、荧光检测技术(Fluorescence detection,FD)、液相-质谱联用(Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)和气相-质谱联用(Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)等常规的方法。这些方法通常很耗时并且比较昂贵,因此并不适合大量样品的检测。此外,目前免疫学检测CIT的方法只有单克隆抗体检测法,由于其制备过程周期长,且随着杂交瘤细胞传代培养次数的增加细胞分泌抗体的能力会下降等因素而限制了其广泛地运用。因此,建立一个高效和廉价的检测农作物中CIT毒素的方法是很有必要的。本研究通过从抗黄绿青霉素的杂交瘤细胞中提取总RNA,然后经过RT-PCR获得cDNA第一条链,以此为模板,PCR扩增获得抗体重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因。以编码(Gly4Ser)3的基因为Linker,通过交错延伸PCR成功组装了完整的scFv基因(cFv-2),并将其克隆到表达载体上进行诱导表达,纯化后获得单链抗体pBD-his-mbp-linker-scFv,经测定抗体亲和力常数为Kaff=4.3 X 108 L/mol。随后,利用易错PCR以scFv-2基因为模板构建了一个库容量为2 X 108pfu/mL的抗CIT单链抗体突变体噬菌体展示库。经生物淘选得到一株高亲和力的抗CIT的特异性单链抗体scFv-5A10。突变型单链抗体亲和力比野生型的单链抗体提高了约13.25倍(Kaff=5.7X 109 L/mol)。经测序和点突变分析证实了位于单链抗体重链CDR3区的P100和轻链FR1区的T151对于抗体的亲和力具有重要的作用。间接竞争ELISA测定表明,CIT的检测线性范围为25～562 ng/mL,IC50=120 ng/mL,最低检测限度为 14.7 ng/mL,平均回收率为(90.612±3.889)%。该研究为建立基于免疫学检测CIT方法和开发生产高质量的检测试剂盒奠定了基础。