柠檬草精油对苯并[a]芘致人胚肺成纤维细胞氧化应激及DNA损伤的影响

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:CPhoenixEx
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目的:通过检测柠檬草精油(LEO)在苯并[a]芘(BaP)染毒人胚肺成纤维(HELF)细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、BaP、3-羟基苯并[a]芘(3-OHBaP)、反式二氢二醇环氧苯并[a]芘-DNA复合物(BPDE-DNA)的含量,研究其变化规律并评价LEO对BaP致HELF细胞氧化应激和DNA损伤的作用,初步探索LEO成为肺癌化学预防的可能性。方法:1.细胞培养与染毒:以HELF细胞为靶细胞,采用完全随机设计的体外培养实验。设0.5%、1.0%和2.5%LEO剂量组和25μMBaP剂量组,以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组。实验随机分为4组:①溶剂对照组;②BaP单独作用组;③LEO单独作用组;④LEO和BaP联合作用组:同时加入各个浓度的LEO和BaP共同培养24h。细胞处理结束后,收集细胞沉淀(内液)及上清液(外液),-80℃保存。2.应用气相色谱-质谱联用(GC/MS)技术对LEO的化学成份进行分析鉴定。3.通过MTT法检测LEO和BaP对HELF细胞存活率的影响,应用BCA法蛋白定量试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、过氧化氢酶(CAT)试剂盒、微量丙二醛(MDA)试剂盒和人8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析试剂盒对细胞内液中SOD、CAT、MDA、8-OHdG的含量进行测定。4.建立高效液相色谱-荧光检测内标法,测定细胞内外液中BaP、3-OHBaP和BPDE-DNA的含量。结果:(1)LEO的主要成份为柠檬醛,其中橙花醛和香叶醛的相对含量分别为37.45%和31.33%。(2)与溶剂对照相比,BaP单独染毒时,可引起HELF细胞存活率显著减少(P≤0.01);与BaP单独作用相比,0.5%和1.0%LEO联合处理组,细胞存活率增加,且在LEO浓度为0.5%时有显著差异性(P≤0.01)。与溶剂对照相比,BaP单独染毒可引起HELF细胞SOD,CAT含量显著减少(P≤0.01)且MDA、8-OHdG含量显著增加(P≤0.01);与BaP单独作用相比,各剂量联合处理组SOD、CAT显著增加(P≤0.01)而MDA、8-OHdG均显著减少(P≤0.01),以上指标均都不存在剂量依赖效应。(3)应用高效液相色谱-荧光检测内标法在细胞内外液中仅检测出BaP的含量,而未检测出3-OHBaP和BPDE-DNA的含量。与BaP单独作用相比,各剂量联合处理组细胞内外液中BaP含量均增加。结论:一定剂量的LEO能使BaP诱导的HELF细胞存活率增加,氧化应激减轻,细胞DNA损伤减弱,提示LEO有抗氧化功能且对BaP引起的氧化应激及DNA损伤有保护作用。LEO有望成为肺癌化学预防的新来源。
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