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PEG化胶束能够阻碍药物在肿瘤细胞内的释放,使药物难以发挥最佳疗效,PEG水化层带来的弊端引起了研究人员的广泛关注。本课题设计并合成了具有还原响应性的聚合物--聚乙二醇5000二硫二维生素E琥珀酸酯(P5kSSLV),通过还原敏感键--二硫键,将亲水基团PEG和疏水基团维生素E琥珀酸酯连接。合成的载体在水溶液中可自组装成胶束,进入肿瘤细胞后,受还原环境刺激,二硫键发生断裂使胶束结构破坏,从而实现药物的快速释放。以DOX作为模型药物,将DOX与P5kSSLV自组装制备还原响应PEG可断裂的载DOX聚乙二醇5000二硫二维生素E琥珀酸酯(P5kSSLV-DOX)纳米胶束。系统地研究了 P5kSSLV的合成及载体性质、P5kSSLV-DOX纳米胶束的制剂学特征、还原响应性、细胞毒性、细胞摄取及机制、细胞凋亡、体内药动学及药效学行为。1H NMR确认P5kSSLV聚合物合成成功,其临界胶束浓度为1.97 溶血性实验表明,与Tween-80和Cremophor EL相比,P5kSSLV具有更低的溶血性,可用于静脉注射。还原响应研究证实,P5kSSLV在还原条件下,可发生二硫键断裂,使亲水基团与疏水基团发生分离。采用薄膜水化法制备还原响应P5kSSLV-DOX纳米胶束,胶束为球形,大小均一,粒径为26.64 nm,Zeta电位为-0.84 mV,载药量为4.07%,包封率为92.37%;DSC研究表明,DOX以无定形状态包裹于纳米胶束中。还原响应研究表明,P5kSSLV-DOX在非还原条件下,粒径保持在30 nm左右,胶束溶液为红色澄清透明溶液,24 h释放DOX约30%,释放后溶液中有胶束存在;在还原条件下,胶束粒径先减小后增大,胶束溶液变浑浊,24 h释放DOX 50%以上,释放后溶液中无胶束存在。以上结果提示P5kSSLV-DOX纳米胶束在肿瘤细胞外可稳定存在,进入肿瘤细胞后,胶束解散使DOX快速释放。以人源乳腺癌细胞MCF-7为模型细胞,非还原响应P5kLV-DOX纳米胶束为对照制剂,对P5kSSLV-DOX纳米胶束的细胞毒性、细胞摄取及机制、细胞凋亡进行研究。细胞毒和线粒体膜电位研究证明P5kSSLV空白胶束具有抗肿瘤活性。细胞毒实验表明,与P5kLV-DOX纳米胶束相比,P5kSSLV-DOX纳米胶束进一步提高了 DOX的抗肿瘤活性。共聚焦显微镜和流式细胞仪考察MCF-7细胞对各制剂的摄取情况,结果显示P5kSSLV-DOX的摄取存在时间和浓度依赖性。与P5kLV-DOX相比,P5kSSLV-DOX组中有更多的DOX聚集在细胞核内。Annexin V-FITC/PI 双染法考察 DOX-Sol、P5kSSLV-DOX 和 P5kLV-DOX 引起 MCF-7 细胞的细胞凋亡情况,结果表明,与P5kLV-DOX相比,P5kSSLV-DOX可提高细胞凋亡能力。内吞抑制研究表明,P5kSSLV-DOX纳米胶束通过能量依赖的巨胞饮和小窝蛋白介导的内吞进入到肿瘤细胞中。以耐DOX的MCF-7/Adr细胞为模型细胞,初步考察了 P5kSSLV-DOX纳米胶束克服肿瘤多药耐药性。与DOX-Sol和P5kLV-DOX相比,P5kSSLV-DOX的细胞毒性显著提高。与DOX-Sol相比,P5kSSLV-DOX可提高DOX在MCF-7/Adr细胞中的摄取量。建立UPLC-MS/MS法测定大鼠尾静脉注射DOX-Sol和P5kSSLV-DOX纳米胶束后的体内药动学行为。结果显示,与DOX-Sol相比,P5kSSLV-DOX能够增加DOX的AUC和t1/2,显著延长DOX在血液中的循环时间,具有长循环的特点。考察P5kSSLV纳米胶束的体内分布,通过小鼠尾静脉注射荧光染料Cy7和P5kSSLV-Cy7纳米胶束,考察不同时间心、肝、脾、肺、肾、肿瘤的离体成像效果,结果表明,注射制剂12 h和24 h后,P5kSSLV-Cy7纳米胶束组在肿瘤的荧光强度显著高于游离Cy7组,提示PSkSSLV纳米胶束具有长循环特点并且具有肿瘤靶向性。体内药效研究表明,与DOX-Sol相比,P5kLV-DOX和P5kSSLV-DOX均具有较高的抑制荷4T1瘤小鼠体内肿瘤生长的作用,且还原响应P5kSSLV-DOX纳米胶束抑制肿瘤生长效果更好。同时,P5kLV-DOX和P5kSSLV-DOX均可显著降低DOX的系统毒性。