异氟醚单独或联合咪达唑仑对7日龄大鼠大脑Caspase-3表达的影响

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目的建立新生大鼠异氟醚吸入麻醉模型并评价其可行性;观察单独异氟醚或联合咪达唑仑对7日龄大鼠大脑组织Caspase-3表达的影响。方法Penlon Prima SP麻醉机、异氟醚挥发罐及自制带进出气口的麻醉小室。共97只符合要求的7日龄的SD大鼠用于实验。1.建立模型并评价:将其中35只大鼠随机分为7组(n=5)。实验组(Ⅰ—Ⅵ组)异氟醚挥发罐刻度分别为0.125%,0.25%,0.5%,1%,1.5%,2%;新生大鼠置于自制密封麻醉小室内,分别通入含上述异氟醚浓度的混合气体。对照组(Ⅶ组)给予未混合异氟醚的30%的氧气。将小室安放于37℃恒温箱内。调节气体流量2L/min。实验组于通入气体5,10,15,30,90,180,360min(T1—7)时于小室出口处抽取10ml气体,采用气相色谱法测定麻醉小室内异氟醚浓度。于通入气体360min(T7)对各组新生大鼠自左心室采血行血气分析;另取SD大鼠20只,随机分为对照组(n=10),1.5%异氟醚组(n=10),按上述方法建立异氟醚吸入麻醉模型,麻醉结束后2h处死大鼠,采用免疫组织化学法观察对照组和1.5%异氟醚组大鼠大脑海马区活化的Caspase-3的表达。2.取SD大鼠42只随机分为对照组(C组,n=14),异氟醚组(I组,n=14)和咪达唑仑联合异氟醚组(MI组,n=14)。C组:腹腔注射0.9%生理盐水10ml/kg,吸入30%氧气6h;I组:在通入1.5%异氟醚的麻醉小室内维持麻醉6h;MI组:腹腔注射咪达唑仑9mg/kg后,随即在通入1.5%异氟醚的麻醉小室内维持麻醉6h,麻醉小室置于37℃恒温箱内。麻醉结束即刻每组取4只大鼠,行动脉血气分析。麻醉结束2h采用Realtime-PCR方法检测皮质和海马组织Caspase-3mRNA水平的变化;并用免疫组织化学SABC法检测大脑活化的Caspase-3阳性神经细胞的分布情况,计数阳性细胞。结果1.麻醉小室出口异氟醚浓度(Y)与麻醉机挥发罐异氟醚浓度(X)的直线回归方程为Y=1.5472X-0.0575(r=0.9993)。2.建模后测量血气分析结果发现Ⅰ-Ⅵ组与Ⅶ组血气分析组间差异无统计学意义(P>0.05);模型组I组和MI组大鼠麻醉结束即刻动脉血气分析结果与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3. RT-PCR结果显示,I组与MI组大鼠皮质和海马区Caspase-3mRNA与对照组相比表达增多,且MI组与I组比较Caspase-3mRNA表达增加(P<0.05)。4.免疫组织化学法结果显示:与C组相比,I组与MI组大鼠在海马、皮质及丘脑区域活化的Caspase-3阳性神经细胞数量均明显增多(P<0.05),MI组在海马及丘脑区域活化的Caspase-3阳性神经细胞数量升高更明显(P<0.001);而且MI组与I组相比,在海马和丘脑区域活化的Caspase-3阳性神经细胞数量明显增多(P<0.05)。结论应用麻醉机、异氟醚挥发罐及自制密封带进出气口的麻醉小室成功建立了新生大鼠异氟醚麻醉模型;临床浓度的吸入麻醉药异氟醚麻醉能诱导突触发生期大鼠大脑海马、皮质及丘脑区域Caspase-3表达增加;联合应用咪达唑仑后Caspase-3表达增加更明显。推测Caspase-3表达增加并活化可能引起凋亡级联反应,导致神经细胞凋亡增加,但其具体机制还有待于进一步研究。
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