凋亡素是鸡贫血病毒(chicken anemia virus，CAV)来源的一个小分子蛋白，能够选择性地诱导肿瘤细胞非P53依赖的凋亡，而对正常细胞无任何毒副作用。凋亡素在肿瘤细胞中的特异磷酸化和核定位被认为是诱导肿瘤细胞凋亡的关键因素，但其特异诱导肿瘤细胞凋亡的机制目前尚未完全研究清楚。　　 目的：观察凋亡素在肿瘤细胞与正常细胞内的定位以及诱导凋亡情况；探讨凋亡素特异诱导肿瘤细胞凋亡的机制。　　 方法：(1)利用激光共聚焦荧光显微镜观察凋亡素在肝肿瘤细胞HepG2与肝正常细胞HL-7702的细胞定位情况。(2)采用NP-40法分离凋亡细胞的片段化DNA，DNA ladder实验检验凋亡素诱导肝肿瘤细胞HepG2与肝正常细胞HL-7702的凋亡情况。(3)利用荧光差异双向电泳来分析取自肝肿瘤细胞HepG2与肝正常细胞HL-7702的核内蛋白样品，并且通过质谱鉴定细胞核内相关差异表达的蛋白，western blot实验验证质谱鉴定结果。(4)免疫荧光实验观察肿瘤细胞HepG2与正常细胞HL-7702转染凋亡素后，凋亡素与Hsp70的细胞定位情况。(5)流式细胞仪检测凋亡素以及Hsp70蛋白的抑制剂KNK437对肝肿瘤细胞HepG2与肝正常细胞HL-7702的细胞周期的影响情况。　　 结果：(1)激光共聚焦荧光显微镜观察显示GFP-apopt in在转染24小时后定位在肿瘤细胞HepG2的核内，较弥散，转染48小时后在核内聚集成颗粒状，并且有凋亡形态发生，细胞核的染色质高度凝聚，细胞核裂解为碎块，凋亡小体产生；正常细胞HL-7702在转染GFP-apoptin24小时，可见其在核内核外均有表达，转染48小时后，GFP-apopt in则定位在细胞浆内，并且沿细胞膜边缘聚集，无凋亡现象发生。(2)DNA ladder实验结果显示肿瘤细胞HepG2转染凋亡素96小时后可见DNA梯形条带，而正常细胞HL-7702转染转染凋亡素96小时后未见DNA梯形条带。(3)通过荧光差异双向电泳以及质谱分析鉴定出热休克蛋白70等蛋白表达存在差异，western blot实验证实Hsp70和Hsc70蛋白均在HepG2细胞转染空载体组中表达较高，在转染凋亡素后则表达下降。(4)免疫荧光实验观察到HepG2细胞转染凋亡素后12小时，Hsp70蛋白与GFP-apoptin共定位在细胞核内，在转染24小时后，GFP-apoptin仍定位在细胞核内，而Hsp70蛋白在核内则定位较少，主要集中在细胞质中；正常细胞HL-7702在转染凋亡素12、24小时后，Hsp70蛋白的细胞定位始终在细胞浆内。(5)流式细胞仪检测HepG2细胞在24小时KNK437组中空载体和凋亡素组的G2期分别为22.7％和43.1％，48小时检测，KNK437组中凋亡素组，G2期细胞含量高达54.9％；HL-7702细胞在KNK437作用下，24小时空载体和凋亡素组的G2期分别为10.4％和22.8％，48小时空载体和凋亡素组的G2期分别为37.7％和33.5％。　　 结论：(1)凋亡素在正常细胞中经过入核再出核的过程，最终定位于细胞质，不诱导正常细胞凋亡，在肿瘤细胞中凋亡素只入核不出核，定位于细胞核，诱导肿瘤细胞凋亡。(2)凋亡素在正常细胞中不调节热休克蛋白70的表达，在肿瘤细胞内抑制热休克蛋白70的表达。凋亡素通过抑制热休克蛋白70的表达，特异性诱导肿瘤细胞凋亡。(3)在肿瘤细胞内，热休克蛋白70先与凋亡素共定位于细胞核内，随后凋亡素留在核内，热休克蛋白70出核，定位在细胞质中；在正常细胞中热休克蛋白70始终定位于细胞质中。(4)凋亡素能够通过抑制热休克蛋白70表达，使肿瘤细胞G2/M期阻滞，诱导肿瘤细胞凋亡。