论文部分内容阅读
研究目的:胰岛素抵抗是多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）的一项重要病理生理改变。PCOS患者子宫内膜胰岛素抵抗影响子宫内膜功能,但目前对于子宫内膜胰岛素抵抗的病因机制研究较少。既往研究认为皮质醇的过度累积与糖尿病及胰岛素抵抗的发生密切相关,而皮质醇在PCOS患者子宫内膜胰岛素抵抗中的作用尚不明确。因此,本研究旨在探究皮质醇在多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素抵抗中的影响,并进一步探索其对于子宫内膜胰岛素抵抗的作用机制。研究方法1.根据鹿特丹诊断标准纳入PCOS组患者,并进一步分为PCOS合并胰岛素抵抗组（insulin resistance,IR）和PCOS未合并IR组;非PCOS组患者纳入单纯管性因素不孕,正常BMI未合并胰岛素抵抗的患者。2.针对冷冻胚胎移植患者,在充分沟通、知情同意情况下,在取卵后第5天暨hCG日后第7天,对内膜进行轻搔爬,将内膜组织分为4份用于后续研究,或直接用于细胞提取。3.通过临床信息统计分析,统计三组患者的基本资料以及种植率。4.采用免疫检测试剂盒检测内膜萃取样本中皮质醇及可的松水平;采用PCR、Western blotting检测三组患者内膜样本中11β-HSD1/2的表达水平。5.通过PCR检测三组患者子宫内膜组织样本中PTEN的表达;通过Western blotting检测三组患者子宫内膜组织样本IRS-1、p-IRS1 Ser307、p-IRS1 Ser318、p-IRS1 Ser612、Akt、p-Akt、PTEN的表达;并通过GLUT4转位试验、葡萄糖摄取实验进一步论证三组患者原代子宫内膜上皮细胞葡萄糖摄取能力有无差异。6.自子宫内膜组织中提取原代子宫内膜上皮细胞,体外培养三天后,加入皮质醇处理细胞24h,采用Western blotting、葡萄糖摄取实验检测皮质醇对原代子宫内膜上皮细胞胰岛素通路、葡萄糖摄取的影响。7.加入胰岛素通路重要分子PTEN的抑制剂,探索PTEN在皮质醇对子宫内膜胰岛素抵抗中的作用。研究结果1.PCOS合并IR组空腹胰岛素水平、稳态模型评估-胰岛素抵抗指数（homeostatic model assessment-insulin resistance,HOMA-IR）、胰岛素敏感性定量检查指数（quantitative insulin sensitivity check index,QUIKI）均显著高于非PCOS组及PCOS未合并IR组。PCOS合并IR组种植率存在低于非PCOS组的趋势（p=0.06）,提示PCOS合并IR组可能存在子宫内膜功能受损。2.非PCOS组、PCOS未合并IR组、PCOS合并IR组的皮质醇和可的松总和无显著差异,PCOS合并IR组的皮质醇水平、皮质醇与可的松的比值均显著高于非PCOS组及PCOS未合并IR组,PCOS合并IR组的可的松水平显著低于非PCOS组,提示PCOS合并IR组子宫内膜局部存在糖皮质激素代谢失衡。3.三组患者内膜样本中11β-HSD1的表达水平无显著差异,PCOS合并IR组的11β-HSD2的表达水平显著低于其余两组,且11β-HSD2表达与可的松水平呈正相关、与皮质醇水平呈负相关,提示PCOS合并IR组子宫内膜局部的糖皮质激素代谢失衡可能是由于11β-HSD2表达下降所引起的。4.PCOS合并IR组子宫内膜组织IRS-1 Ser318、Ser612磷酸化水平升高、Akt Ser473位点磷酸化水平降低、PTEN表达升高,自PCOS合并IR患者中提取的子宫内膜上皮细胞葡萄糖摄取减少、GLUT4转位受损。这些现象均提示PCOS合并IR组患者子宫内膜局部存在胰岛素抵抗。5.在来源于非PCOS患者及PCOS患者子宫内膜样本的原代子宫内膜上皮细胞中,皮质醇的添加均能够抑制葡萄糖的摄取、Akt磷酸化以及GLUT4转位,提示皮质醇增加会使胰岛素通路受损,这可能是PCOS合并IR组患者子宫内膜胰岛素抵抗的重要原因之一。6.在原代子宫内膜上皮细胞中,添加PTEN抑制剂,能够有效逆转皮质醇对于胰岛素通路的抑制作用,提示在皮质醇对于胰岛素信号通路的抑制中,PTEN起到了重要作用。研究结论PCOS合并IR患者子宫内膜局部存在皮质醇、可的松代谢失衡以及胰岛素通路受损。其中,11β-HSD2表达降低是PCOS合并IR患者子宫内膜局部皮质醇增加的主要原因。子宫内膜局部过多的皮质醇可能通过促进子宫内膜上皮细胞PTEN的表达,降低子宫内膜上皮细胞Akt磷酸化、GLUT4转位和葡萄糖摄取,最终导致PCOS患者子宫内膜局部胰岛素抵抗。