【摘 要】
：
新型鹅星状病毒病是由新型鹅星状病毒（Novel Goose Astrovirus,NGAstV）引起的以雏鹅痛风为主要特征的一种急性、高度接触性传染病,多侵害4～21日龄的雏鹅,死亡率可达30%,对养鹅业发展造成重大损失。目前,对该病的研究多集中在病原核酸检测和病毒分离鉴定,缺少血清学研究。此外,市场上适用于鹅的酶标二抗价格昂贵且质量参差不齐,影响了该病血清学检测的准确性。随着临床隐性感染鹅群的不
论文部分内容阅读
新型鹅星状病毒病是由新型鹅星状病毒（Novel Goose Astrovirus,NGAstV）引起的以雏鹅痛风为主要特征的一种急性、高度接触性传染病,多侵害4～21日龄的雏鹅,死亡率可达30%,对养鹅业发展造成重大损失。目前,对该病的研究多集中在病原核酸检测和病毒分离鉴定,缺少血清学研究。此外,市场上适用于鹅的酶标二抗价格昂贵且质量参差不齐,影响了该病血清学检测的准确性。随着临床隐性感染鹅群的不断增多,迫切需要一种血清学检测方法以便了解在不同层次鹅群中NGAst V抗体的分布情况。因此,本研究首先制备HRP-兔抗鹅二抗,以此为基础建立NGAst V抗体间接ELISA检测方法,并应用于临床不同日龄鹅群的NGAst V抗体检测,以期为NGAst V病的流调提供行之有效的抗体检测方法,同时也为将来疫苗效果的评估奠定基础。1 HRP-兔抗鹅IgY重链的制备取新鲜鹅蛋分离卵黄,水稀释法去除卵黄内非水溶性蛋白,乙醇分级沉淀法去除脂蛋白,获得初步纯化的鹅卵黄免疫球蛋白（IgY）,经SDS-PAGE电泳,切取分子量为67k Da～70k Da处鹅IgY重链蛋白,蛋白浓度为1.63mg/m L。取鹅IgY重链蛋白按照常规免疫程序免疫家兔,免疫程序完成后第七天采集兔血清,间接ELISA试验测得血清最高效价为1:40000;Western-blot鉴定该血清能够与鹅IgY重链蛋白发生特异性结合;使用Protein A-Sephrose FF亲和层析纯化兔抗鹅IgY血清,冷冻干燥后取其中2.5mg兔抗鹅IgY进行HRP标记,经分光光度计测定HRP/Protein摩尔比为2.18。2新型鹅星状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立以NGAstV ORF2重组蛋白作为包被抗原,建立NGAstV抗体间接ELISA检测方法。经过试验条件参数的优选,确定ELISA工作条件为:NGAst V ORF2重组蛋白以1.25μg/m L的浓度,在4℃包被过夜;封闭液选择5%脱脂奶,37℃封闭2h;一抗稀释倍数为1:60,37℃孵育2h;HRP-兔抗鹅IgY工作浓度为1:2000,37℃孵育1h;TMB作用条件为37℃,反应20min;阳性判定临界值为OD450≧0.159。重组蛋白仅与NGAst V阳性血清反应,不与鹅细小、鹅新城疫、鹅坦布苏等疾病血清发生交叉反应;该方法敏感性试验显示NGAst V阳性血清在1:960倍稀释时结果仍为阳性;批内重复性试验和批间重复性试验中变异系数分别为1.838%～5.953%和3.93%～6.572%,变异系数均在10%以内。3新型鹅星状病毒抗体间接ELISA检测方法的初步应用利用建立好的NGAstV抗体间接ELISA方法对来自安徽5个雏鹅孵化场以及2个种鹅场（依次命名为A～G场）共计199份血清样品进行抗体检测,结果共检测出血清阳性样品181份,阳性率高达90.95%（181/199）。其中,A～D场均为1日龄雏鹅,抗体阳性率在76.92%～100%;F～G场为300日龄和360日龄种鹅,抗体阳性率为94.12%和96.67%。综上所述,本研究通过纯化鹅IgY重链蛋白免疫家兔制备了兔抗鹅IgY抗体,并进行抗体纯化和HRP标记,获得了HRP-兔抗鹅IgY抗体;以NGAst V ORF2重组蛋白作为包被抗原,抗NGAst V ORF2阳性鹅血清为一抗,HRP-兔抗鹅IgY抗体为二抗,建立了检测NGAst V抗体的间接ELISA方法,应用此方法对199份雏鹅和种鹅血清样品进行检测,结果NGAst V抗体阳性率为76.92%～100%。此方法的建立将为临床NGAst V病的流调和防控提供一种有效的手段。
其他文献
产业结构作为国民经济结构的直观反映,是我国经济高质量发展的重要衡量指标。早于十一五时期,我国便指出了展开产业结构调整,提高产业整体竞争力的重要意义。尽管在经历了十余年的快速发展后,我国已经实现了服务业主导的合理产业结构转型,但产业链不通畅、区域发展不平衡、现代服务业体系建立不完全等问题仍然存在。我国在十四五规划中,再次提出了实现产业基础高级化与产业链现代化,大力发展现代服务业的发展目标,同时也提出
为了积极应对气候变化,我国于2021年全国两会期间提出了“碳达峰”和“碳中和”的战略目标。由此,本文结合“双碳”战略视角,以及建设黄河生态经济带国家战略的提出,将创新要素与碳排放相联系,通过空间计量模型,分析流域内各个区域之间创新要素和碳排放的空间分布特征,探讨创新要素空间配置与碳排放强度之间的空间关系。研究内容对于提升经济社会发展质量和发展水平,加强流域生态保护,坚守生态红线,实现流域低碳和可持
机场航站楼作为民航运输旅客吞吐量的载体,属于大规模人员聚集场所。一旦发生地震、火灾、爆炸等突发事件,需要在短时间内对机场航站楼内的大量人员进行紧急疏散,如果应急疏散路径不畅通或者应急疏散预案不合理,则会发生拥堵、踩踏甚至人员伤亡等安全事故。尤其当到港航班比较密集时,大量旅客在短时间内到达机场,就会形成短时间内的大规模到港客流,且机场到达层通道相对狭窄,结构曲折且到达旅客的行程大多需要经过楼层转换,
统编高中语文教材“课”的构成原则发生了变化,不再是以单篇课文或课时作为“课”的基本构成单位,而是依据“任务”设“课”,“一课”之下编排多篇文本。“一课多篇”是统编高中语文教材最突出的编排特点之一,但新教材“一课多篇”类文本的教学仍存在单篇精讲、教学内容学理依据不够等问题。尊重教材才能用好教材,新教材“一课多篇”类文本的教学方式也应该随之改变,不再全都是一篇篇精讲,而是一组组地展开整合教学。本论文共
Fe5C2磁性材料由于其优异的磁性能,良好的化学稳定性,耐腐蚀性,优秀的机械性能和生物相容性而被广泛应用于工程、储能、催化、运输、医疗等各个领域。在这里提出一种简便绿色的气固法用于合成Fe5C2磁性材料并对其形貌进行了设计,详细研究了Fe5C2磁性材料的合成条件与样品性能。进一步地对过渡金属Mn、Co和Ni掺杂的Fe5C2磁性材料进行了深入研究。另外,具有高饱和磁化强度的Fe4N磁性材料所呈现出的
磁制冷技术发展至今,在磁制冷样机、磁制冷工质、磁制冷技术理论等方面取得了突飞猛进的进展,因其环保高效的特点备受广泛的关注。稀土金属间化合物因其磁矩大、居里温度可调、磁热效应大等特点被选为磁制冷工质。其中,RTM5型稀土化合物是一类重要的磁性材料。本文工作对RTM5型稀土化合物的晶体结构和磁性进行了系统的研究。主要研究工作和结果如下:采用电弧熔炼法制备了NdNi4-xCoxCu（x=0,1,1.5,
随着社会经济快速发展和人类活动影响增强,富营养化已经成为水环境领域的一个突出问题。外源输入通常被认定为是造成水体富营养化的主要因素,但现阶段全球和我国的富营养化水体治理实践表明,湖内N、P循环过程对水体营养状态的影响也不可忽视。如何定量的识别内源过程对水体营养状态的影响,并分析未来气候变化对湖内循环过程的影响是未来富营养化湖泊治理的重要内容。本研究剖析了巢湖的长时间序列营养状态变化特征,并结合入湖
随着互联网,智能终端,移动技术的普及,政务服务与信息技术进一步深度融合,政府治理能力不断提升。我国税务部门利用信息技术和移动技术优化办税服务探索研究,成为我国公共管理研究领域重要的课题之一。税收信息化建设已初步形成,纳税人可通过线上办税平台、移动办税、自助机办税多元办税渠道进行涉税事项办理。但仍存在业务覆盖不全面,纳税人受众面小,使用频率低等问题。而在疫情蔓延下,基于纳税服务需求和防疫需求“非接触
本文通过气动挤出式成型原理,提出一种适用于热电池薄膜正极制备的3D打印技术,并进行设计与实验,旨在制造出更加薄且均匀的热电池薄膜正极,提高材料的利用率以及薄膜的成型精度。本文介绍了挤出式3D打印技术的工艺特点,对整个系统进行设计与搭建,分析打印系统的工作原理及系统组成,包括运动平台、喷头的设计,解决喷头运动和材料挤出的关键性问题。分析打印系统的控制部分,包括步进电机的控制,驱动气压的控制,解读了打
为促进火电厂汽轮机的稳定运行，必须做好火电厂汽轮机的优化运行，改善汽轮机的运行环境，降低汽轮机运行中的资源消耗，从而促进火电厂的持续稳定发展。针对火电厂汽轮机的优化运行策略进行分析研究，期望能为相关从业者提供可靠的参考依据。