论文部分内容阅读
效应蛋白是病原真菌的主要致病因子之一。目前关于胶孢炭疽病菌LysM型效应蛋白的研究十分有限,本研究在前期研究的基础上克隆了橡胶树胶孢炭疽病菌的一个LysM型效应蛋白编码基因,命名为Cg4LysM,对其功能进行了初步的研究,得到以下结果:本研究通过RT-PCR技术扩增了Cg4LysM基因的cDNA全长序列,测序表明,该基因含1983个碱基对,编码一个660个氨基酸的多肽,由297个极性残基、208个疏水基残基、8个强碱性残基和59个强酸性残基。生物信息学分析结果显示,该蛋白含有4个保守的LysM结构域,,不含任何跨膜结构域,推测为胞外分泌蛋白。同源性比较分析结果发现,该蛋白与草莓胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Nara gc5)、高粱炭疽病菌(Colletotrichum sublineola)、石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum CBS)的LysM蛋白同源,同源性分别为97%、59%、55%。为了研究Cg4LysM基因的功能,我们通过同源重组的方法构建了Cg4LysM基因的敲除突变体(徐文晶等,2015;郭立佳等,2014;),命名为△Cg4LysM。对△Cg4LysM突变体的表型进行分析,得出以下结果:(1)与野生型菌株相比,△Cg4LysM的菌落形态和孢子形态没有明显变化,但菌落的生长速率降低,孢子产量下降;(2)△Cg4LysM对蔗糖的利用增强;(3)△CgLysM对橡胶树叶片的致病性减弱,但对寄主细胞的机械穿透力没有变化。以上结果表明,胶孢炭疽病菌Cg4LysM基因不仅参与病原真菌的生长发育和能量代谢过程,而且与病菌的致病性相关,但与真菌的机械穿透力无关。