目前癌症被世界卫生组织称为危害人类五大疾病之一,针对于癌症的治疗有多种方式,其中化疗是对恶性肿瘤较为有效的治疗方式。根据癌细胞与正常细胞的增殖不同,大部分抗癌药物的作用原理通常是通过破坏细胞分裂的机制来抑制癌细胞的生长扩增,例如抑制DNA复制、损伤DNA或是阻止染色体分离。大多数化疗药物都没有专一性,所以会同时杀死进行细胞分裂的正常组织细胞,因而伤害常需要进行分裂以维持正常功能的健康组织。这些毒副作用使药物治疗的效率与质量下降,从而影响患者的生存率,因此美国临床肿瘤学会提出寻找化疗药物保护剂来降低化疗药物对正常组织细胞的毒性。阿霉素被认为是有效的化疗药物,但是阿霉素存在毒副作用如心脏毒性,心脏中毒在临床上表现为从无症状到可能威胁到生命的充血性心脏衰竭。已有报导证实右雷佐生可作为保护剂与阿霉素在转移性乳腺癌中联用。目前保护剂除了西药之外,也可以从天然植物中寻找,天然植物中拥有丰富的成分,而包括云南在内的西南地区有丰富的天然植物为寻找天然药物与保护剂提供了丰富的资源。如普洱茶,本实验室研究表明普洱茶可以作为保护剂抑制阿霉素对正常细胞引起的凋亡。本实验室前期研究用凋亡染色方法表明普洱茶可以降低阿霉素导致的正常细胞的凋亡,实验处理方式为:先用一定浓度的普洱茶处理野生型小鼠胚胎成纤维细胞24h后,再加入一定浓度阿霉素共同作用细胞12h、24h后进行凋亡染色,结果与阿霉素单独作用相比,可以降低阿霉素对小鼠胚胎成纤维细胞的凋亡,提示普洱茶可能存在保护正常细胞的作用;并且用同样处理方法发现在普洱茶与阿霉素共同处理肿瘤化小鼠细胞p53-/-+s+ras时可以增加细胞的凋亡,这又提示普洱茶可能增加肿瘤细胞对阿霉素的敏感性。研究普洱茶保护作用机制时发现,普洱茶的保护作用可能与其同阿霉素共同作用使后热休克蛋白70、热休克蛋白90、p53蛋白的表达降低有关。但是在研究普洱茶的増敏作用时发现热休克蛋白90没有明显变化,热休克蛋白70表达有所降低,说明在肿瘤细胞内普洱茶的作用与在正常细胞内有所不同。本论文对普洱茶的保护作用机制进一步进行研究。发现在普洱茶预先处理野生型小鼠胚胎成纤维细胞24h后,再加入阿霉素共同作用细胞8h后与阿霉素单独作用相比开始降低细胞内的DNA损伤程度,并且DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达同样降低。同时发现普洱茶与阿霉素共同作用后降低阿霉素导致的热休克蛋白转录因子HSF1的表达,已知Sirt1蛋白可以稳定HSF1蛋白的作用,发现Sirt1蛋白的表达在普洱茶与阿霉素共同作用后降低,这说明普洱茶的保护作用可能是通过抑制Sirt1蛋白来抑制HSF1的表达,从而使热休克蛋白的表达降低。而前期数据中p53蛋白的表达降低,可能是与DNA损伤降低、热休克蛋白表达降低相关。除了研究普洱茶的保护作用机制,还进一步寻找普洱茶作用的有效成分,实验检测普洱茶已知成分如咖啡因、没食子酸、槲皮素是否具有降低阿霉素对小鼠胚胎成纤维细胞凋亡的作用,结果中未发现明显的保护作用。本论文进一步研究普洱茶的増敏作用,用同样的肿瘤化p53-/-+s+ras细胞,但是本论文对于普洱茶的増敏作用研究结果与前期数据有所不同,本论文检测caspase3蛋白的表达,发现在普洱茶与阿霉素共同处理24h后切割带并没有明显增加,用AnnxeinV/PI双染流式检测凋亡,从细胞凋亡率来看普洱茶与阿霉素共同作用后比单加阿霉素凋亡增加,但是统计分析观察到细胞凋亡率在普洱茶与阿霉素共同作用时与阿霉素单独作用相比较没有显著性差异,所以不能明确普洱茶是否具有增敏作用。但是在降低阿霉素的浓度为后,在普洱茶与阿霉素共同处理24h后从caspase3蛋白的表达和AnnxeinV/PI双染结果,均可以看到普洱茶增加了阿霉素对细胞的凋亡。具体増敏机制还未完全清楚,但是可以确定普洱茶的増敏机制与突变p53蛋白、HSF1蛋白的表达降低有关。综上所述本论文对普洱茶可以作为保护剂降低阿霉素对正常细胞引起的凋亡的作用机制进行了进一步的探索,结果表明普洱茶可以降低阿霉素引起的细胞DNA损伤及DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的表达,并且降低阿霉素作用后p53、HSP70、HSP90、HSF1、Sirt1蛋白的表达。同时普洱茶的増敏作用可能还需要进一步用不同的方式验证,并且其増敏作用与普洱茶降低突变p53蛋白和HSF1蛋白有关。