杆状病毒是一类以昆虫和甲壳类无脊椎动物为宿主的病原微生物。苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus, AcMNPV)是昆虫杆状病毒的模式种。其基因组长134kb，共有154个开放阅读框。根据基因表达时间不同可分为早期基因和晚期基因。晚期基因的表达需要一类蛋白因子调控，即晚期表达因子(Late ExpressionFactor, lef)，lef-10就是其中之一。已经研究发现BmNPV lef-10是一个必需基因，其缺失会影响病毒DNA的复制、晚期基因的转录和早期基因的表达水平。为了研究lef-10在AcMNPV中是否是一个必需基因，本研究构建了AcMNPV lef-10基因敲除的bacmid，并在重组病毒侵染的昆虫细胞中对该基因的生理功能进行了分析，还对AcMNPV LEF-10羧基末端功能区作了精细的鉴定，这为进一步研究lef-10的功能提供了一定的理论基础。研究证实lef-10基因起始密码子ATG下游十个碱基的缺失不会影响其下游基因的表达，所以本研究利用Red/ET重组技术，通过引进AMP抗性筛选标记成功构建了AcMNPV lef-10基因缺失的重组bacmid。我们还构建了天然启动子控制下表达lef-10的重组质粒pTriEx-innateP-lef10，用以形成lef-10补回型病毒。用野生型病毒、lef-10缺失型重组病毒和lef-10补回型重组病毒分别感染Sf9细胞，通过显微镜观察发现lef-10缺失型重组病毒不能使细胞产生病变；而lef-10补回型重组病毒使细胞产生病变的能力与野生型基本一致，说明lef-10基因缺失型重组病毒不能产生有感染性的病毒粒子，lef-10基因是AcMNPV的一个必需基因。对lef-10基因进行敲除时考虑到由于lef-10和必需基因vp1054有重叠，所以为了最大限度地避免对lef-10临近基因上下游调控序列的扰动，我们利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选策略构建了点突变的lef-10缺失型重组bacmid。引进点突变的方法是通过两次Red/ET重组：第一次重组引进rpsL-AMP抗性筛选标记，第二次重组通过链霉素反向筛选去除rpsL-AMP抗性筛选标记，同时引入相应的点突变。接着，我们构建了野生型、lef-10缺失型和lef-10补回型重组病毒，用这三种病毒感染Sf9细胞，显微镜下观察病毒病变情况，结果发现lef-10缺失型重组病毒能够影响病毒的复制，不能产生有感染性的BV，这与已投递的BmNPVlef-10的功能是一致的。为了研究LEF-10上的功能肽段，确定其功能区，我们构建了一系列截断LEF-10的质粒，用截断LEF-10的质粒与lef-10-ko-bacmid共转染Sf9细胞，通过显微镜观察分析以及流式细胞分析，得到LEF-10的功能区是其N端的48个氨基酸。