【摘 要】
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在植物遗传转化中,为了从大量非转化细胞中获得转化体,选择标记基因起着非常重要的作用。随着越来越多的转基因植物进入环境释放或商品化种植,转基因作物中选择标记基因对生态环
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在植物遗传转化中,为了从大量非转化细胞中获得转化体,选择标记基因起着非常重要的作用。随着越来越多的转基因植物进入环境释放或商品化种植,转基因作物中选择标记基因对生态环境和食品安全的风险问题日益成为国内、国际争议的焦点。因此,遗传转化后如何有效地删除选择基因已成为作物基因工程改良的关键。在标记基因删除的方法中,诱导型位点特异性重组更能节省时间,简化操作,更快的获得无标记基因的转基因植株。本研究克隆了热激启动子hsp18.2和低温诱导的启动子wcs120,构建了诱导表达的CinH/RS2位点特异性重组植物表达载体,并对烟草SR1和小麦绵阳19进行了转化,获得以下的实验结果:(1)热诱导的位点特异性重组植物表达载体构建及烟草转化克隆了拟南芥热激启动子hsp18.2,构建了由热激启动子诱导表达的CinH/RS2位点特异性重组系统植物表达载体pXL5513-hsp,并通过农杆菌转化烟草SR1,成功获得了12株转基因阳性植株,为进一步研究热诱导的CinH/RS2位点特异性重组系统在植物遗传转化中的应用奠定了基础。(2)低温诱导的位点特异性重组植物表达载体的构建及小麦幼胚愈伤组织的转化从小麦西农928中克隆出低温诱导启动子wcs120,并构建由wcs120启动子诱导的CinH/RS2位点特异性重组系统植物表达载体,通过带有(PYR1-LIKE5)PYL5抗旱基因的表达框RD29A-PYL5-nosT的亚克隆,成功构建了带有目的RD29A-PYL5-nosT表达框的低温诱导位点特异性重组植物表达载体;通过基因枪转化小麦绵阳19幼胚愈伤组织,获得了6株带有PYL5基因的转基因阳性植株,为进一步获得无标记基因的转基因小麦奠定了基础。
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