目的:研究酵母细胞中Whi2蛋白对自噬的调控机制。方法:通过同源重组法构建基因缺陷型酵母菌株,通过转入特定质粒过表达相关蛋白。利用prATG8-GFP质粒检测特定营养条件下细胞内自噬基因ATG8的转录水平,并通过蛋白免疫印迹显示GFP的表达量间接反应细胞内自噬诱导的水平。利用prATG8-GFP-ATG8质粒检测低浓度亮氨酸条件下细胞内自噬流水平,游离GFP占GFP表达总量(游离GFP与GFP-Atg8融合蛋白的总和)的比值即可反应细胞内自噬流的水平。并根据基因上位性分析法对结果进行分析,构建信号通路。结果:通过prATG8-GFP-ATG8质粒检测细胞内自噬流水平发现,无论是低浓度亮氨酸条件下还是无氮源的条件下,△whi2中GFP-Atg8的表达量都明显比WT中少。分别在WT和△whi2中敲除PEP4抑制自噬小体的降解过程,△whi2△pep4与△pep4相比,细胞内GFP-Atg8的表达量也明显降低。同时,通过prATG8-GFP质粒检测到Awhi2 WT中ATG8转录水平低,△whi2△pep4中ATG8转录水平比△pep4低。PKA对自噬诱导和自噬流水平有抑制作用,在△whi2中抑制PKA的活性对自噬诱导和自噬流水平没有影响;但敲除TPK3后在细胞内过表达Whi2仍然可以促进自噬的诱导和提高自噬流水平。在低浓度亮氨酸和去除氮源的条件下,在敲除UME6的细胞内过表达Whi2,并没有提高自噬的诱导水平;而在敲除了WHI2的细胞中过表达Ume6,却能够抑制ATG8的转录;同时,在敲除RIM15的细胞内过表达Whi2,也不能提高ATG8的转录水平。△msn2△msn4中ATG8转录水平与△whi2中ATG8转录水平相似。无论是低浓度亮氨酸条件下还是去除氮源的条件下,在敲除WHI2的细胞内过表达Msn2或Msn4都可以提高细胞内ATG8的转录水平。与Awhi2相比,Amsn2△msn4中TORC1活性低得多,且自噬流水平偏高。结论:1.Whi2从转录水平促进细胞内自噬基因ATG8的诱导。2.Whi2位于PKA的下游,PKA通过Whi2抑制自噬的诱导和自噬流水平。3.Whi2位于Rim15-Ume6上游,通过激活Rim15进而抑制Ume6促进自噬的诱导。4.在自噬诱导过程中,转录因子Msn2和Msn4的功能具有相似性。5.Msn2/Msn4位于Whi2的下游,对自噬诱导的调控不依赖Whi2。