国内外有因染发导致肾脏疾病的发生或使原有肾脏疾病加重<[1]>，以及误服染发剂导致急性横纹肌溶解综合征和急性肾功能衰竭<[2-6]>，甚至死亡的病例报告<[7,8]>。本实验探讨氧化型染发剂主要成分对人肾小管上皮细胞(human kidney cells,HK-2 cells)的作用，观察了氧化型染发剂对人肾小管上皮细胞的增殖能力、损伤及细胞凋亡的影响。 目的：探讨氧化型染发剂对体外培养的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡及损伤的影响。 方法：采用对数生长期的人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞株)加入不同浓度的氧化型染发剂分别孵育12小时和24小时。本实验共分四组：空白对照组(无血清的RPMI-1640培养液)；氧化型染发剂I组(无血清的RPMI-1640培养液+对苯二胺0.4ug/ml+0.3％H<,2>O<,2>)：氧化型染发剂Ⅱ组(含无血清的RPMI-1640培养液+对苯二胺4ug/ml+0.3％H<,2>O<,2>)；氧化型染发剂Ⅲ组(无血清的RPMI-1640培养液+对苯二胺40ug/ml+0.3％H<,2>O<,2>)。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的增殖能力，观察氧化型染发剂在不同浓度和不同作用时间对HK-2细胞增殖的影响；测定培养液中LDH的水平，观察氧化型染发剂在不同浓度和不同作用时间对HK-2细胞损伤的影响；采用RT-PCR法检测Caspase-3 mRNA的表达水平及用免疫细胞荧光法来检测XAF-1蛋白的表达，观察不同浓度的氧化型染发剂对HK-2细胞凋亡的影响。 结果： 1．氧化型染发剂在不同浓度和不同作用时间对HK-2细胞增殖的影响： 氧化型染发剂对HK-2细胞作用12小时和24小时的MTT结果：各实验组与对照组比较A<,492>值均有明显下降(P<0.01)；染发剂Ⅱ组和染发剂Ⅲ组与染发剂Ⅰ组比较A<,492>值亦有明显下降(P<0.01)，染发剂Ⅲ组与染发剂Ⅱ组之间比较A<,492>值亦有明显下降(P<0.01)。实验结果显示：氧化型染发剂作用12小时和24小时对HK-2细胞增殖均有抑制作用，其抑制的程度均呈浓度依赖性，抑制率与对数浓度呈直线正相关，氧化型染发剂作用12小时和24小时对HK-2细胞生长的抑制率与氧化型染发剂浓度的回归方程分别为：Y=36.170+22.028lgX，r=0.916.P<0.001，IC50值为1.87ug/ml；Y=47.172+20.193lgX，r=0.952,P<0.00l，IC50值为1.15ugml。IC50随氧化型染发剂作用时间延长而降低。 2．氧化型染发剂对HK-2细胞乳酸脱氢酶的影响： 氧化型染发剂对HK-2细胞作用12小时和24小时的细胞乳酸脱氢酶检测结果如下：各实验组与对照组比较LDH值均有增加(P<0.05)；染发剂Ⅱ组和染发剂Ⅲ组与染发剂Ⅰ组比较LDH 值亦有明显增加(P<0.01)，染发剂Ⅲ组与染发剂Ⅱ组之间比较LDH值亦有明显增加(P<0.01)。 3．氧化型染发剂对HK-2细胞的Caspase-3 mRNA表达的影响： 氧化型染发剂对HK-2细胞作用24小时的Caspase-3 mRNART-PCR．结果：染发剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照组比较，Caspase-3 mRNA表达明显增加(P<0.01)；染发剂Ⅱ组和染发剂Ⅲ组与染发剂Ⅰ组比较Caspase-3 mRNA表达明显增加(：P<0.01)；染发剂Ⅲ组染发剂Ⅱ组之间比较Caspase-3 mRNA表达明显增加(P<0.01)。 4．氧化型染发剂对HK-2细胞的XAF-1蛋白表达的影响： 40ug／ml对苯二胺+0.3％H<,2>O<,2>处理24小时的HK-2细胞XAF-l蛋白的免疫细胞荧光结果显示：胞核可见大量的绿色荧光，显示XFA-1强阳性表达。对照组细胞的免疫细胞荧光结果显示：胞核可见少量弱的绿色荧光，显示XAF-1弱阳性表达。 结论： 1．氧化型染发剂(对苯二胺0.4～40ug／ml浓度范围内+0.3％H<,2>O<,2>)对HK-2细胞作用12和24小时，均可抑制人肾小管上皮细胞增殖，并随着浓度和时间的增加抑制作用增强。 2．氧化型染发剂(对苯二胺0.4～40ug／ml浓度范围内+0,3％H<,2>o<,2>)对HK-2细胞作用12和24小时，均可促进人肾小管上皮细胞损伤，并随着浓度和时间的增加损伤作用增强。 3．氧化型染发剂(对苯二胺0.4～40ug／ml浓度范围内+0.3％H<,2>o<,2>)对HK-2细胞作用24小时，会引起人肾小管上皮细胞凋亡，并随着浓度的增加凋亡增加。