油菜-BnAtg8转基因系的建立与分析

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:harryleexxx
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
自噬(Autophagy, AP)是真核生物在正常的生长发育过程中,或者遭受生物、非生物胁迫时细胞质组分降解-再利用的方式之一,对于维持细胞的稳态平衡、发育模式的重构、自体免疫以及抗氧化胁迫等方面都有着重要的作用。此外,有研究表明自噬还与植物的抗逆性相关。参与自噬过程的基因被称为自噬相关基因(Autophagy-related gene, ATG), ATG8是ATG基因家族重要的成员之一,与自噬体的形成密切相关。此前,本课题组在雄性可育系(Male fertility, MF)和不育系(Male sterile, MS)的油菜(Brassica napus L.)小孢子母细胞中发现存有类似植物自噬体(泡)结构,并且克隆出了ATG8基因(命名为BnAtg8)。本实验将BnAtg8和BnAtg8-GFP分别导入甘蓝型油菜MF和MS系基因组建立了相应的BnAtg8过表达系,旨在通过对这些转基因系的形态学、遗传学、细胞生物学和分子生物学分析,进一步确认小孢子母细胞中自噬体(自噬现象)的存在及其形成机制。主要研究结果如下:(1)以油菜的下胚轴为受体,结合农杆菌介导的遗传转化和离体诱导植物再生,经过PCR鉴定,共得到8个MF-BnAtg8(MFA1-8)、10个MF-BnAtg8-GFP (MFAG1-10)、11个MS-BnAtg8(MSA1-11)和11个MS-BnAtg8-GFP(MSAG1-11)过表达转基因系。(2)在含有潮霉素平板上对以上转基因系T1代进行筛选,共得到4个具单拷贝插入的转基因杂合系(MFAG-2、MFAG-3、MSA-7和MSAG-7)。与MF相比,MFAG-2的花序茎明显变细,MFAG-3的果荚数明显减少,MFAG-2和MFAG-3的分支数明显减少。与MS相比,MSA-7和MSAG-7分支数明显减少。(3) RT-PCR半定量检测发现,在以上4个转基因系当中,BnAtg8转基因均有表达,表达水平都低于内源Atg8基因的表达水平。(4)激光共聚焦显微镜观察发现,MFAG-2和MSAG-7的幼苗根尖均显示GFP荧光信号,但荧光信号定位有所不同:在MFAG-2中主要集中在分生区和伸长区,而在MSAG-7中主要集中在分生区和根冠区。观察子叶原生质体发现GFP信号主要分布在叶绿体周围。(5)用自噬体特异性染色剂MDC对MFAG-2和MSAG-7幼苗根尖染色后用激光共聚焦显微镜观察发现,在MFAG-2中MDC信号主要分布在分生区和伸长区,而在MSAG-7中MDC信号主要分布在分生区和根冠部位。MDC与GFP信号出现位置基本一致。MDC信号定位和强度在转基因和野生型根尖中无明显区别。(6)研究MFAG-2和MSAG-7转基因系的抗盐性发现,在盐(NaCl)胁迫条件下(150mmol,12h光照/12h黑暗,7d),野生型(MF、MS)和转基因系初生根和下胚轴的生长速率与对照组相比都明显下降,但是转基因系降低的程度明显小于野生型。(7)分析MFAG-2和MSAG-7转基因系对饥饿胁迫的响应发现,在不加碳(蔗糖)的培养基上培养7天后,初生根和下胚轴伸长的速率在野生型和转基因系之间无明显差异。以上结果说明,BnAtg8的过表达可以提高油菜的抗盐性,也表明自噬与植物的抗盐性可能有关。因时间关系,仅对转基因系的表型,生理生化和分子生物学特征进行了初步分析。对于转基因系内BnAtg8-GFP在花粉母细胞中的情况有待进一步研究。
其他文献
目前,治疗癌症的疫苗需要简单而且行之有效的配方,用来增强体液和细胞免疫应答。纳米技术在疫苗研发过程中受到了越来越多的重视。因为纳米粒子(NPs)广泛的选择范围,为纳米粒
在人工智能时代,以关键词搜索的方式获取信息存在着很多的局限性,已经不能满足互联网用户获取信息的需求。例如,用户搜索不到真正需要的信息,返回的无关信息太多,或者用户需要的信息未排列在前几位结果中。能够接受用户以自然语言的形式提问,并能从大量的数据中查找或推断出用户问题答案的问答系统就成为了当前学者们的研究热点。问答系统按照问题的领域可以分为开放领域和限定领域的问答系统,根据答案的生成方式可以分为检索
本文章主要应用积分算子理论和微分不等式方法(或者称作上、下解方法),在适当条件下来证明一类三阶非线性三点边值问题解的存在性和唯一性,并且在此基础上研究在实际运用中会
时滞反应扩散方程所描绘的系统发展不仅依赖于当前的状态,也依赖于过去某些时刻或时间段的状态,正是由于时滞项的存在,使得它能够更加客观真实的描述实际问题,在对问题的解决
目的:研究急性气管-支气管炎在现代微观脉学中的涩脉是否为振动波,进一步确定该疾病涩脉在脉诊中相应的寸关尺的分部及分层。方法:本研究拟用振动波脉诊探测系统收集50例急性气管-支气管炎患者脉搏涩脉类振动波,用道生DS01-E中医体质健康管理系统收集其脉搏压力波,进行对比。另收集50例正常人脉搏振动波与压力波,作为对照组。将两组振动波波形进行分析对比,寻找急性气管-支气管炎涩脉在振动波波形中的位置,并以
本文主要针对两类带时滞的Lotka-Volterra模型的稳定性进行了研究。主要内容如下:(1)对一类带时滞的Lotka-Volterra捕食与被捕食连续模型进行了研究,通过对其进行线性化处理后
随着2017年我国施行新《行政诉讼法》(以下简称《行诉法》),行政公益诉讼制度在我国正式确立。为确保法院正确适用判决形式,保证公共利益得到切实有效的维护,2018年3月,最高人民法院、最高人民检察院(以下简称两高)联合出台《最高人民法院最高人民检察院关于检察公益诉讼案件适用法律若干问题的解释》(以下简称《公益解释》),明确规定行政公益诉讼适用的六种判决形式。然而,随着司法实践推进,行政公益诉讼判决
近几年,随着科技不断发展和创新,四阶抛物方程在许多学科领域中的研究越来越深入,应用越来越普遍,因而受到很多学者的关注。比如来源于固体表面微滴扩散的薄膜方程,用于研究
随着全民运动的兴起,运动损伤的发生比例越来越高。采用康复机器人进行运动损伤康复具有治疗精准、康复速度快、康复效果好等诸多优点,所以开展康复机器人的运动控制研究同样具有重要的理论意义和实用价值。为了满足上下肢多关节运动损伤康复的需求,本文提出了基于导纳模型的康复运动控制算法,可以实现主动、被动、协调运动等多种康复方法。首先,对本文要研究的运动损伤上下肢康复机器人的特点进行了分析,根据运动损伤及运动康
学位
随着政策的持续完善和资本市场的稳步发展,我国的PE行业呈现越来越成熟、越来越健全的发展态势。截止2016年,私募股权投资基金呈现爆发式增长,逐步发展为我国资本市场一只规