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目的1建立生物样品中利多卡因、普鲁卡因、布比卡因原体及分解产物的气相色谱（GC）及气相色谱-质谱联用（GC/MS）定性定量分析方法;2建立生物样品中利多卡因、普鲁卡因和布比卡因的分解动力学研究方法;3研究不同存贮条件下生物样品中利多卡因、普鲁卡因和布比卡因的浓度变化规律,指导选择最佳检材存放条件,为局麻药硬膜外麻醉意外死亡和中毒案件的法医学鉴定提供实验依据。方法1气相色谱/气质联用分析方法:1.1样品处理:脑组织（匀浆）、血液、尿液样品中加入内标物,经酸、碱化处理后,乙醚萃取。1.2气相色谱分析条件:DB-5毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）,程序升温模式:150℃（1min）→10℃·min-1→280℃（2min）;检测器为NPD,温度300℃;进样口空气60KPa,氢气2.3 KPa;载气:N2 1.5 ml·min-1。1.3气质联用分析条件:DB-5毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）,电子能量70ev,质量范围:50～650,柱温:150℃（1min）→10℃·min-1→280℃（2min）;离子源温度:200℃,传输线温度:250℃,载气:He:1.5 ml·min-1。1.4定性定量方法:利用保留时间结合特征离子峰（气-质联用）定性,内标法和工作曲线法（气相色谱）定量。2分解动力学研究:2.1分组:利多卡因、普鲁卡因和布比卡因实验组犬各4只,分别按2倍极量30mg·kg-1、60mg·kg-1和10mg·kg-1于5分钟内匀速注入犬蛛网膜下腔。2.2分解动力学研究:注入药液后立即处死动物,分别采取脑组织、心血和尿液,每种样品分三等份分别置于20℃、4℃、-20℃环境中保存,于死后不同时间点检测各保存条件下利多卡因、普鲁卡因和布比卡因的含量,winolin软件拟合分解动力学方程,计算利多卡因、普鲁卡因和布比卡因在不同保存条件下（20℃、4℃、-20℃）不同样品（脑组织、血液和尿液）中的分解半衰期。2.3 SAS9.0重复测量设计资料方差分析法统计数据,对各药的温度之间、时间之间进行配对t检验,比较不同温度对各药的分解动力学过程有无影响。结果1气相色谱/气质联用分析:利多卡因、普鲁卡因、布比卡因、SKF525A和各药分解产物的保留时间分别为8.20、9.70、12.00、12.10和7.80、8.62、11.58min;特征离子片段分别为86、58、30;86、99、120;140、84、98;86、91、99和68、121、165;120、137、92;98、70、42。各峰形均对称,可完全分离。脑组织、血液和尿液中利多卡因、普鲁卡因和布比卡因工作曲线线性检测范围分别为0.5～20μg·ml-1、0.5～25μg·ml-1和0.5～20μg·ml-1,最低检出限0.05μg·ml-1,方法回收率91±2.1%～114±4.2%,RSD均小于10%。2利多卡因、普鲁卡因和布比卡因在生物样品中的分解动力学2.1分解动力学方程及参数:利多卡因、普鲁卡因和布比卡因在生物样品中的分解动力学符合一级动力学过程,可用lgC=lgCo-kt/2.303表示,式中k为一级分解速率常数。脑组织、血液和尿液中利多卡因在20℃、4℃和-20℃存储条件下的分解半衰期t1/2分别为17、30、34;27、35、35和13、14、47天;普鲁卡因的分解半衰期t1/2分别为2、2、2;2、7、15和35、42、49天;布比卡因的分解半衰期t1/2分别为33、64、72;51、71、80和17、60、81天。2.2各药不同储存条件下的含量变化趋势本实验研究结果显示,20℃、4℃、-20℃保存时,脑组织、血液和尿液中利多卡因含量均在第8、48和8天显著下降（P＜0.05）;脑组织中利多卡因含量在20℃保存80天、4℃保存120天降为0μg/g,-20℃降至初始值的4.2%;血液中利多卡因含量在20℃保存96天降为0μg/ml,4℃和-20℃保存120天分别降至初始值的5.0%和7.6%;尿液中利多卡因含量在20℃、4℃和-20℃保存120天分别降至初始值的1.1%、4.5%、13.0%。20℃、4℃、-20℃保存时,脑组织、血液和尿液中普鲁卡因含量分别在保存第2、2、2,2、4、8和32、48、64天显著下降（P＜0.05）;脑组织、血液和尿液在-20℃保存120天中普鲁卡因含量分别为初始值的1.0%、1.9%和35.6%。20℃、4℃、-20℃保存时,脑组织、血液和尿液中布比卡因含量在保存第8、16、64,4、4、8和2、4、16天显著下降（P＜0.05）;脑组织、血液和尿液在-20℃保存120天中布比卡因浓度分别为初始值的54.5%、35.5%和33.2%。结论1建立了脑组织、血液和尿液中测定利多卡因、普鲁卡因、布比卡因的GC及GC/MS分析方法,可使药物原体和代谢产物完全分离,该法简便、灵敏、重现性好,适用于利多卡因、普鲁卡因和布比卡因麻醉意外案例的快速鉴定。2建立了利多卡因、普鲁卡因和布比卡因在生物样品中的分解动力学研究模型,可应用于其法医毒理学研究。3利多卡因、普鲁卡因和布比卡因在各保存条件下均有分解,20℃保存时分解较快,其次为4℃,-20℃保存时分解较慢,因而麻醉意外死亡和中毒案件的法医学鉴定中应注意冷藏或冷冻保存检材,并尽快检验。4利多卡因、普鲁卡因、布比卡因在生物样品内的分解动力学符合一级动力学过程,可用lgC=lgCo-kt/2.303表示,利用该分解动力学方程,可以推断解剖或死亡当时体内药物含量,为麻醉意外死亡和中毒案件法医学鉴定中毒物检验结果的分析提供了实验依据。